실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
bisulfite coversion 관련하여 질문입니다.
레벨1 김홍기 (대학생)
안녕하세요 제가 아는게 없고 부족하여 질문을 두서없이 하는점 미리 죄송하다는 말을 올립니다...
사용하는 bisulfite 시약에는 500bp~30kb의 DNA를 사용할것을 권하고
있고 DNA에 Bisulfite 처리를 하여 메틸레이션을 평가를 해야합니다.
질문
1. Bisulfite처리후 메틸레이션이 일어나지 못한 시토신이 우라실로 변하게 되어 ssDNA 상태가 된다고 알고있습니다. 그후 다시 우라실은 티민으로 변하게 되어 ssDNA 가 dsDNA로 변환된다고 알고있습니다. 이때 우라실이 티민으로 변하는 과정은 추가적인 pcr을 통해서 변환시킬수 있는것인가요? 아니면 Bisulfite처리후 Clean up 과정에서 일어나는 것인가요? 아니면 혹시 제가 전부 잘못알고 있는것인가요..? ㅠㅠ
2. Bisulfite 처리시 PCR을 처리한 유전자를 사용해야하나요? 왜냐하면 해당 gDNA가 30kb가 넘을경우에 프라이머를 이용하여 확인하고 싶은 부위를 [ (예) 엑손1번부분] 증폭시킨후 얻어진 PCR 산물을 Bisulfite처리 해야하는 것인가요?
두서없이 질문드려 다시한번 죄송하다는 말 올립니다.
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