찌그러지는 형태도 여러가지 입니다.

어떤 형태인지 감이 안잡히네요.

well은 필요한 갯수만 loading해도 되고 단백질 양이 각각 달라도 됩니다.

gel을 직접 만들었다면 buffer문제, 균일하게 굳지않은 문제, electrode문제 등

여러가지 원인이 있을 겁니다.

SDS-PAGE의 초기 전개에는 시료의 salt 농도가 단백질 이동속도에 영향을 줍니다. 모든 lane에 같은 농도의 salt 를 가지는 단백질을 로딩하면 각 lane의 밴드들이 깨끗하게 전개됩니다.

그래서 모든 lane에 같은 salt농도의 시료를 다 로딩하거나, 빈 well에 sample buffer를 넣어주는게 좋습니다.

단백질 시료에 들어간 sample buffer가 5ul라면 빈 well에도 saple buffer 5ul를 넣어주면 좋습니다.

각 well에 로딩양이 달라도 상관은 없으나 각 시료에 섞어준 saple buffer의 양은 맞춰주는게 좋습니다.

5개 lane중에 maker제외하고 4개 lane에  5 12 20 28ul을 로딩한다고 하면, 가장 양이 많은것이 28ul이므로, 저 같으면 나머지 시료들도 1X sample buffer를 23ul, 16ul, 8ul 를 넣어서 최종 부피를 같게 맞춰줍니다. 나머지 well에도 같은 양의 sample buffer를 넣어주고요. 그러면 로딩양도 같고 sample buffer의 양도 같아지므로 아무래도 각 lane의 밴드들이 비슷하게 흐르겠죠.

이전에도 SPEED님께서 답변을 주셨던 내용입니다ㅠㅠ

상단부분은 더 내려오고 하단 부분은 덜 내려오는 듯한 모습도 관찰되며

2번 10번 레인에서 옆으로 길죽하게 퍼지는? 늘어지는 현상도 관찮이 됩니다. 

여기서 제일 의문인것은 같은 제작용액 같은 기기 같은 buffer를 사용하고 / 동일한 사람또는 다른 사람이 실험하는 경우에 제대로 내려올 때도, 찌그러 질때도 있습니다. 

혹시 buffer가 세는게 많으면 심하게 찌그러 지는 경우가 생길까요? 확인은 하고 있습니다만...

예전에 gel을 본 기억이 납니다.

아직 해결이 안되었나 보네요.

buffer가 세면 그 부분을 중심으로 잘 안내려가서 휘어지는 현상이 나오기는

합니다만..

미세하게나마 buffer가 세면 정상적으로 내려갈 때 보다 V나 mA값에 변동이

생기니 확인해 보세요.

전기영동 시작전 upper buffer의 높이를 눈금으로 그어서 변화가 있는지도

확인해 보세요.

버퍼 세는것도 확인하고 있고 용액모두 새것으로 바꾸었습니다. 

기존에는 V기준으로 내리고있었습니다만 요즘 이전에 사용하던 V로는 디텍션이 안되어서 A기준으로 내리고 있습니다.

초기에 Gel 2개기준 0.02A로 설정하면 50V정도에서 시간이 지나면서 V가 70-80까지 오르더라구요 이후 stacking 지나면 0.04A로 설정하며 내리고있습니다. 이 때 V는 180V정도 입니다.

보통 내리시는 V나 A의 기준이나 전체적인 gel내리는 시간은 어느정도가 적당한가요..? 

너무 기본적인 질문들이라 여쭙기 죄송하네요.. 찾아보고 있으나 확 와닿는 결론이 없네요 ㅠㅠ

SDS-PAGE 전기영동에서 V를 고정하거나 A를 고정하거나 아무런 문제는

없습니다.

얼마 정도의 power로 해야된다는 기준 또한 없습니다.

전기영동에 문제만 없으면 아무런 관계가 없습니다.

저의 경우 upper gel은 80V, lower gel은 150 ~ 180V 사이에서 항상 합니다.

이것 또한 하나의 예로 다르게 해도 전기영동이 잘되면 아무런 문제가 없습니다.

gel은 현재 사용하는 걸로 만들고 전기영동 장치는 다른 lab에 있는 걸로 한번

해보세요.

어제 다시 gel을 내려 보았을 때는 또 이상 없이 정상적으로 잘 내려왔네요 

기기자체 결함일수도 있겠다는 생각이 듭니다. 

도움이 많이 되었습니다. 감사합니다. speed님 강시님