실험 Q&A Cell Biology > Cell Culture
toluidine blue, alcian blue 염색이 안됍니다 ㅠㅠ...
레벨1 아자아자!! (대학생)
안녕하세요.. 연골세포의 characterziation을 위해 toluidine blue 염색을 하고 있는데 무엇이 문제인지 당최 염색이 되지 않고 다음처럼 나옵니다.. cell plate 에서 바로 고정/염색하는 방법이에요.
저희 실험실에서는 해본적이 없어 다른 실험실 친구한테 받은 프로토콜은 이렇습니다.
1. 세포 supernatant 제거 후 DPBS로 Washing 2번
2. 4% paraformaldehyde로 30분~45분 상온 고정
3. DPBS Washing 2번
4. Add Alcian blue solution (60파이 기준 2ml) 1시간 동안 염색
5. 0.1 N HCL 용액으로 washing 3번
6. DPBS Washing 2번
7. 현미경으로 관찰입니다..
이런식으로 나오는 상황이구요... 세포만 계속 버리게되어서 무슨문제가 있는지 모르겠습니다...
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