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transformation하는 과정인거죠?
heatshock 주고난 후 SOC 또는 LB 를 넣고 shaking incubator에서 1시간?
이 시간은 transformation 과정 중에 또는 competent cell을 만드는 과정 중에 대장균이 받은 손상을 회복하는데 필요한 시간이며 벡터에 있는 항생제 마커가 발현되서 항생제 내성을 가지는데 필요한 시간입니다.
대략 1시간이 필요하지만 경험상 40분 정도면 된다는 의미입니다.
1. CaCl2로 만든 CP cell은 복구 시간을 주지 않아도 잘 자랍니다.
이건 CP cell을 하나 꺼내서 plate에 spreading해보면 확인가능합니다.
2. TC, CM과 같은 항생제는 TF 후 안정화 시간이 필요하지만 Amp 내성은
상대적으로 짧은 시간 안정화 해도 clone selection에 별 문제 없습니다.
따라서 항생제 내성에 따라 40분정도 필요한 경우도 있고 필요 없는 경우도
있습니다.
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레벨5
CHINyo76_philekorea
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20.06.30 16:27
보통은 E. coli의 generation time (15-20 min) 때문에 그랬던거 같네요.