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전체 DNA가 4Kb에서 vector 3kb, insert 1kb라면
자르기전 vector양에서 vector와 insert가 3 : 1 비율로 구성되어 있습니다.
따라서 1ug을 자르면 vector가 0.75ug, insert가 0.25ug을 차지합니다.
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레벨1
intoth
(대학원생)
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20.06.30 12:05
답변 감사드립니다.
다른 종류의 바이러스를 사용하여 동일한 조건으로 TA 클로닝을 했을 때도 1kb지만 충분히 많은 insert DNA를 얻어서 선명한 밴드를 확인할 수 있었습니다.
이 경우와 어떤 차이가 있을까요?
두경우의 사진을 봐야지 어느정도 차이가 나는지 알수 있겠지만 물리적으로
vector에 있는 insert는 전체 vector 크기에서 차지하는 비율만큼 얻어집니다.
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레벨1
intoth
(대학원생)
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20.06.30 12:20
좋은 답변 감사드립니다
젤 상에서 DNA 밴드의 농도는 EtBr 과 결합한 정도에 따라 달라집니다.
DNA 전기영동 후에 staining-destaining을 하면 DNA 크기와 밴드 농도가 비례합니다.
하지만 ERtBr이 미리 들어간 젤에 DNA를 전개하면 EtBr은 DNA와 반대방향(+ 극에서 - 극으로) 움직입니다.
전개가 되면서 작은 DNA는 서서히 EtBr이 빠지기 시작해서 점점 밴드 농도가 옅어지지만 큰 밴드는 나중에 EtBr 이 빠지기 시작하므로 상대적인 밴드 농도차이는 시간이 갈수록 차이가 커집니다.
그래서 논문에 사용하려면 전기영도 후에 staining-destaining 을 하면 예쁜 밴드사진을 만들 수 있습니다.