실험 Q&A Microbiology > Bacteria
bacteria SEM preparation protocol 관련 질문 드립니다!
레벨2 다옹 (대학원생)
안녕하세요 제가 실험하는 물질과 박테리아를 SEM 에서 보고 싶어 전처리 과정을 하는데 막히는 부분이 있어 질문드립니다.
연구실 선배 중에서도 탈수 포함한 전 과정을 해본 사람이 없어서 자세한 과정 질문드려요ㅠㅠ
일단 제가 하려는 protocol을 대략적으로 알려드리면 다음과 같습니다.
1. 박테리아를 1OD까지 키운 뒤 PBS Wash -> 실험 물질 일정량 넣기.
2. 2hr incubation
3. PBS wash -> 고정액(2% paraformaldehyde) 4C에서 overnight.
4. PBS wash로 고정액 제거
5. Ethanol로 탈수 (30%, 50%, 75%, 85%, 95%, 100%X2 각각 10분간 진행예정)
6. 100% 용액을 silicon wafer에서 RT drying
위 과정중에서 4번 이후 상세 방법이 궁금합니다.
이미지의 상태를 각각 ①, ②로 표현하겠습니다
1) 1.과 3.에서 PBS wash 할때는 [①을centrifuge -> ②상태에서 상층액 제거 후 PBS 넣기 -> vortex로 섞기] 과정으로 진행하는데 4.에서도 동일하게 wash 하나요? 아니면 ②처럼 vortex를 생략한 뒤 pellet을 유지하고 상층액만 갈아주나요?
2) 5.에서 탈수 과정을 진행할때는 ②상태에서 상층액만 10분마다 바꿔주는 건가요? 아니면 vortex로 ①처럼 만들고 centrifuge를 하는 것인가요?
3) 마지막 단계에서 silicon wafer 위에 놓는 용액은 Ethanol 100% 용액 상태 맞나요? 보통 몇 uL정도 따서 말리시나요?
3-2) 만약 2)에서 vortex를 하지 않고 pellet 상태를 유지한다면 silicon wafer에서는 pellet 채로 올리나요, 아니면 vortex로 pellet을 깨서 올리나요?
질문이 많네요ㅠㅠ 질문중에 하나라도, 조금이라도 아시는 분은 답변 주시면 감사하겠습니다!!
Bio마켓 프리미엄