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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 E coli가 이상합니다ㅠㅠ
개구리힘들다힘들어(대학원생)  | 06.26 13:19
첨부파일 파일첨부: 캡처.PNG (1.02 MB)
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안녕하세요!
오늘 단백질 발현을 해두기 위해서 라지 스케일로 가기전 스몰스케일을 하던 중(~2시간반) 딜루션을 하기 위해 확인한 스몰스케일 샘플에서 뿌옇게 잘 자라는 E coli가 아닌, 실처럼 대장균이 떠다니는 현상을 보았습니다.
혹시 이 원인을 아시는 분 계실까요? 저희가 사용하는 strain은 BL21(DE3)Plyss이고, Amp: 100ug/ml, Chl: 34ug/ml 의 농도로 사옹하였으며 배지는 LB 입니다.


+)사진이 잘 안보여서 추가합니다.

https://www.researchgate.net/post/cell_clumps_floating_debris_found_in_primary_M9_overnight_culture

여기 증상과 유사합니다!

저희는 늘 암피실린과 클로람페니콜을 같이 넣어왔었는데 한번도 관찰되지 않던 증상입니다ㅠㅠ

#E coli
 
#protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  06.26 14:01  

몇시간 배양했나요?

lysis된것 같이 보입니다.

개구리힘들다힘들어  |  06.26 14:11  

2시간 30분 정도 배양했습니다ㅠㅠ 왜 갑자기 이런 증상이 일어나는지 파악이 되지 않네요ㅠㅠㅠ 

대왕개구리SPEED  |  06.26 14:17  

phage 오염일 수도 있구요..

개구리힘들다힘들어  |  06.26 14:31  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
첨부파일 파일첨부: 캡처.PNG (940 KB)
이미지 첨부파일

방금 항생제 없는 샘플에서 또 이런 증상이 나타났습니다ㅠㅠ(좌측투명: 항생제 없는 샘플, 우측: 항생제 있는 샘플)

이번에는 또 항생제 있는 군에서는 멀쩡히 자라고 있네요..

이런 경우 어떻게 해결을 해야할까요? ㅠㅠ 만일 phage contamination 이면 어떻게 해결해야하나요?

대왕개구리강시  |  06.26 14:37  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

균을 배지에 두껍게 발라보세요. LB, LB+chlor 배지 모두에.

파지 오염이면 전체가 안자라거나 군데군데 동그랗게 안자라는 곳이 생깁니다.

 

만일 파지 오염이 확인되면 그 세균, 배지, 사용했던 팁통 등등 가능한 모든 것들을 두번 오토클레브 돌리세요.

버릴 수 있는것은 다 멸균해서 버리시고......

개구리힘들다힘들어  |  06.26 14:45  

지난 번 plate 에서 동그랗게 생긴 부분은 없었습니다ㅠㅠㅠㅠ현재 파지를 전혀 사용하지 않는 방인데(한 20년전쯤 쓴거같아요..)  이런 현상이 발생할 수 있나요?ㅠㅠ 

대왕개구리SPEED  |  06.26 20:24  

다시 배양해 보면 괜찮아 질수도 있습니다.

phage가 아닌 경우에도 원인 불명으로 배양액이 투명해 지는 경우가 있기도

합니다.

개구리힘들다힘들어  |  06.26 21:26  

지금 저희 연구실에서 다른 프로틴 익스프레션 하고 있는 친구도 있는데... 그 친구도 같은 현상이 일어나고 있는거라서....뭔가 문제가 있는거 같긴합니다ㅠㅠㅠㅠㅠㅠ

우선 LB 를 다시 한번 오토를 돌려보았습니다ㅠㅠ

전배양을 오버나잇으로 한번 하고 내일 아침에 왔을 떄 어찌 되나 한번 보려고 합니다ㅠ

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