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cell seeding 하고, 바이러스 접종 후 세포 관찰 하셨을 때 세포 confluence는 괜찮았나요?
그리고 overlay 후에 세포 상태 보셨을 때 세포 농도나 damage 관찰하셨나요?
자세한 실험을 어떻게 진행하였다는 내용이 없어서 추측해 보면 plaque gel overlay 하실때
온도가 너무 높아서 세포가 손상된게 아닌가 싶습니다.
세포가 촘촘하게 있어야 염색이 되고 감염된 부분에 투명하게 plaque이 관찰되는 건데
세포가 손상되서 없으니 염색을 해도 plaque 관찰이안되고 횡한 well만 보이는 것 같네요.
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실험이 좋아요
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20.08.28 01:56
MDCK cell이 다 죽어있는 듯하네요...
위에 분 말씀 처럼 과정의 설명이 없어서 정확하게는 모르겠으나,
실험방법에 문제가 없었다면 사진에 6 well 첫 번째칸이 control 이면control에서도 비슷하게 cell이 죽어있네요.
우선, 같은 실험을 같은 set 으로 하나 더 진행하신 다음에 한판은 각 단계별로 현미경으로 계속 보면서 cell이 culture할때와 다른 morphology를 나타내는 시점을 찾아보는게 좋을 것 같아요.
추가하자면,
1. TPCK-trypsin의 농도 조절
2. 지금 사용하시는 PBS는 만들어 사용하시면 회사에서 파는 500ml짜리 PBS로 한번 사용해 보세요.
3. Cell의 Passage number가 높다면 새로 풀어 보세요.
4. Agar는 PBS에 녹이셨겠죠?
5. Fixing 하기전에 control cell 한번 보시고 morphology 문제 없다면 fixing 버퍼를 바꿔보세요. 저는 70% Acetone (D.W)으로 해요.
도움이 되셨으면 좋겠네요.
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바이러스아닙니다돌고래입니다
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23.04.06 11:58
혹시 어떻게 되셨는지 물어봐도 될까요?
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바이러스아닙니다돌고래입니다
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23.04.06 11:59
혹시 어떻게 되셨는지 물어봐도 될까요?
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바이러스아닙니다돌고래입니다
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23.04.06 11:59
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23.04.06 11:59
혹시 어떻게 되셨는지 물어봐도 될까요?