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대식세포 관련 실험을 하려고 하는데 과정 좀 봐주세요!
레벨1 2silvera (일반인)
고등학교에서 대식세포(RAW264.7) 면역 관련 실험을 하려고 하는데
대식세포 추출 과정을
1) 혈액 50mL를 동량의 Dulbecco's phosphate buffered saline 25mL에 넣어 혼합한다
2) 혼합액을 다시 나누고 ficoll-paque를 넣어 원심분리한다
3) 원심분리 후 혈액에서 ficoll 층 위쪽의 면역세포층을 얻어 DPBS로 3회 세척과 원심분리 를 반복하여 순수한 면역세포를 얻는다
4) 배지로 두 번 더 세척하여 남아있는 DPBS를 완전히 제거한다
5) 10% fetal bovine serum이 첨가된 배지로 부유시켜 cell culture dish에 약 1시간 동안 배양한다.
6) 1시간 배양 후 부유된 림프구를 분리하여 배지로 3회 세척하여 모아 배양한다.
7) 대식세포의 NO 활성을 체크해본다
이렇게 썼는데 이게 맞나요? 이 방법으로 분리한 대식세포가 대식세포인지 확인할 수 있는 방법 알려주세요!
이방법이 아니라면 대식세포 분리 방법이나 대식세포 구할 수 있는 방법 아시는대로 알려주시면 감사하겠습니다!
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