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레벨5
모자
(과기인)
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20.06.17 15:04
예를 들면 세포막만 터뜨리고, 어떠한 물질을 넣어서 nucleus만 서로 뭉치게 만들면 가벼운 원심분리로 핵만 얻을 수있을 것 같은데,,
의견 있으시면 답 부탁드리겠습니다 ^^
CHAPS 등의 방법이 있지만,
목적에 따라 매우 많습니다~
000 isolation 검색하시면 됩니다.
하지만 가장 좋은 방법은 immunofluorescence 일 것 같은데..
소기관의 marker, 보려는 인자의 Ab를 이용해서 형광으로 보시고,
필요한 소기관을 각각 맞춰서 분리해 사용하시면 될 것 같습니다.
하지만 100%는 없습니다.
80%만 되도... 정말 훌륭하죠
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레벨5
BlackSmile
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20.06.17 18:08
실험 목적에 따라 달라지겠지만,
일반적으로 Centrifuge 등을 통해서 nucleus나 Mitochondria등을 분리하는 방법은 인터넷에 검색해보면 쉽게 알 수 있습니다.
(Centrifuge속도와 시간에 따라 분리되는 세포소기관이 다릅니다)
그리고 세포막에만 살짝 구멍을 터뜨리는 방법의 경우, 윗 분께서 언급하신 것처럼 Immunofluorescence를 할 때 주로 사용하는 방법입니다.
Antibody가 건강한 상태의 cell의 경우에는 cell membrane을 통과하지 못하기 때문에, cell permeabilization을 통해 구멍을 내서 Antibody가 세포 내부로 들어가도록 유도하는 것은 가능합니다.
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레벨5
모자
(과기인)
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20.06.19 18:29
금강상품권님 답변 감사합니다.
제가 견식이 짧아 선생님의 답변을 이해 못한부분이 있는데요?
immunofluorescence 가 어떤 맥락에서 등장한건가요? 어떤식으로 활용을 해야 염색이 분리에 도움이 되는지 이해를 못했네요...
그리고 80%처럼 수율은 어떤 방법으로 따질 수 있을까요?
조언 부탁드리겠습니다.
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레벨5
모자
(과기인)
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20.06.19 18:33
blacksmile 선생님 답변 감사합니다.
제가 경험이 없어서 그런데, 어떤 방식으로든 세포막에 구멍을 냈을 때, 세포안 소기관은 안전할까요? 계면활성제 등이면 인지질로 이루어진 소기관에도 영향이 있을 것 같습니다.
단순 분석을 위해서라면 소기관의 안전 여부는 필요없어서 고려하지 않았을 것 같은데요
어떻게 생각하시나요?