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plasmid(Circular DNA)를 전기영동하면
보통 두개의 밴드가 나옵니다.
(구글에 plasmid electrophoresis 등으로 검색하시면 금방 자료 찾을 수 있습니다)
두개의 밴드중 밑은 (supercoiled form) 위는 (relaxed form)의 밴드입니다
linear DNA의경우 supercoiled 랑 relaxed 사이에 나옵니다.
supercoiled < linear < relaxed
(DNA ladder의 경우 linear DNA입니다)
즉 위 사진의 경우 circular 인 124에서 supercoiled form이랑 relaxed form이 각각 나오고
제한효소 처리를 해준 3,5 lane에선 linear form이 되므로 124에서 나온 두 밴드 사이에 나오게 되는겁니다.
즉 실험은 잘 된 것 같습니다.
왼쪽 1~5번 lane과 오른쪽 1~5번 lane의 차이는 무엇인가요?
- 왜 Aarl 처리 하지 않은거에서 밴드가 두개가 뜨는지 잘 모르겠습니다.
: 몇번 lane인가요?
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레벨1
뿌이뿡
(대학생)
-
20.06.17 12:02
오른쪽 왼쪽은 단순 벡터차이입니다.
Aar1 처리하지 않은 lane은 1,2,4번인데요
1번은 supercoli 일거 같다는 생각은 했는데,
나머지 2,4에서 밴드가 두개가 떠서 의문이 들었습니다.
목적이 무엇인가요?
insert를 얻기 위해?
단순히 확인을 위해?
대부분 enzyme digestion에서 insert or vector를 얻기 위함이 목적인데,
insert를 확인하고 얻기 위함이기엔 gel % 가 낮은 것 같고,
vector를 확인하고 얻기 위함이기엔 marker를 활용할 수 없어 힘들어 보입니다.
Goldengate assembly로 클로닝한 재조합 플라스미드를 확인하려는 목적 같습니다. 잘리면 원래의 stuff가 들어있는 클로닝 안된 플라스미드이고ㅠ암잘리면 새로운 조각이 삽입된 걸로 판단하는 거 맞지요? 그런데 AarI 효소가 비싸니까 colony PCR과 시퀀싱으로 확인하는 것이 효율적입니다. 비싸도 너무 비싸요.
그림에서 3,5번이 잘린 겁니다.