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레벨5
안녕난세포야
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20.06.16 13:30
cleaved 가 total 대비값이 감소하는건가요?
우선
Cleaved caspase3의 발현양이 증가하는 건 아니고,
Apoptosis 과정에서 full caspase3가 cleavage 되는 것입니다.
일정 양이 넘어서는 순간 다음 signal cascade로 가고,
Phosphorylation 등의 modulation과는 조금 차이가 있습니다.
p-p53과 bax는 계속 증가가 되어도,
Cleaved caspase3는 그렇지 않을 수도 있죠,
또 하나는 cleaved caspase3의 WB은 매우 들쑥합니다.
반드시 재현성을 확보하시길 바라겠습니다.
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레벨1
뚀삐
(대학생)
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20.06.16 13:52
두 분 모두 답변 주셔서 정말 감사합니다:)
우선 western blot은 2번 했는데 비슷한 패턴으로 나왔습니다.
cleaved caspase3 band intensity를 B-actin으로 바로 normalization 했는데 다른 방법으로 보정해야하나요?
2번은 재현성을 2번 보신건지요??
세포사가 유도되고, 진행되는 세포라면,
actin 등으로 보정이 정확하지 않을 수 있습니다. 절대적인건 아니라서..
Caspase3를 확인할때는 full form과 cleavage form을
같이 비교하여, full form의 감소와 더불어, total intensity를 측정하기도 합니다.
하지만 거의 actin으로 정량은 충분합니다.