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total RNA 전기영동 사진은 있나요?
왼쪽에서 3번째 lane 이후 lane은 sample에 차이가 있나요?
왼쪽에서 7번째 시료를 전기영동 loading양의 1/20정도 사용하여 PCR한번
해보세요.
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레벨1
졸업좀..
(대학원생)
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20.06.15 15:22
Total RNA를 전기영동하진 않았고 샘플은 각각 다른 식물 샘플로 부터 온 것입니다.
-왼쪽에서 7번째 시료를 전기영동 loading양의 1/20정도 사용하여 PCR한번
해보세요.
이 말은 RT-PCR된 product를 다시 PCR 해보란 말씀이신가요??ㅠㅠ
RNA는 분리 후 quality를 확인해 보는 것이 좋습니다.
7번 lane의 남은 시료를 PCR 증폭을 해보면 아마도 product가 나올것 같이
보입니다.
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레벨1
졸업좀..
(대학원생)
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20.06.15 15:52
감사합니다!
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지나가다..
(비회원)
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20.06.15 16:12
우선 결과를 보게 되면, 대부분 끌려 나온사진들입니다.
이경우는 크게
1) RNA 샘플내에 inhibitor (polysaccharide나 starch등등)들이 많이 포함되어 있어, 역전사 과정부터 PCR과정까지 효소의 활성을 저해한 경우
2) Target의 GC 비율이 높은 경우
3) PCR 조건이 잘 맞지 않는 경우 입니다.
제 생각에는 RNA의 추출이 잘되지 않아, RNA quality가 낮은 것으로 보여집니다.