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실험반복수에 대해서
레벨1 아카시아꿀 (대학원생)
안녕하세요. 실험디자인을 하고있는 초보대학원생입니다. 제가 실험반복수에 대해 점점 더 헷갈리고있습니다. 먼저 해야할 실험설계는 세포에 특정 유전자 트렌스펙션 후 supernatant sampling - 특정 단백질 정량분석 입니다. 컨트롤을 포함한 실험군 a,b,c,d가 있고 이 4가지를 ELISA로 발현량을 비교할 예정입니다.. 그런데 의문이 드는건 n수를 어디서 얼만큼 늘려야하는지모르겠습니다.. 첫번째로, transfection시 4가지 실험군을 12well plate에 각각 3well씩 동일한 조건으로 시딩하고 동일한 방법으로 단순히 well만 늘리면 n=3가 맞나요? 두번째로, 이러할때 한 실헌군에서의 3개의 well에서 각각 샘플링하엿습니다. A의 경우 a1 a2 a3 이렇게 잇다고하면 엘라이자 진행시 a1에서 분석한 결과,a2, a3에서 분석한 결과의 평균값을 내야 첫번째에서 말한 n=3의 조건이 성립되나요? 세번째, 아니면 a1에 한해서 동일한 엘라이자 실험을 3번 진행했을때 이걸 n=3이라고 봐도 될까요? 이건 뭔가 아닌거같은데 그렇다면 a1,2,3를 각각 3번씩 엘라이자를 해줘야 n=3인가요..? 네번째, 엘라니자 진행시 96well plate에 sample을 duplication으로 보통 로딩하잖아요. Serial dilution을 통해 standard처럼 총 8개의 결과값이 나오게될텐데, 이 전엔 결과해석 밑 분석시 range가 안벗어나면서 cv값이 20%이하인 것들의 평균을 냈습니다. 제 임의의 기준이구요.. 이렇게 평균을 내도 되나요? 이렇게내면 문제가 잇어요 예를들면 어떤 샘플은 5well애서 나온 값을 평균을 내고 어떤건 6개well에서 나온값을 평균을 냅니다. 이래도 되는건가요? 평균을 낼 n개수가 이렇게바뀌어도? 종합하면 제 질문은 이런 것이 지금 혼돈이오고잇어요. 엘라이자 duication을 기본으로하고 serial dilution 햇다하면 그 값들의 평균과 표준편차를 구하고 한 샘플에 대해 엘라이자를 3번해서 평균을 또 구하고 동일한 실험을 한 실험군이 3개있으니 (a1 a2 a3이렇게) 나머지 실험군도 엘러이자 3번에 위 과정을 거쳐야...n=3가 되는건가요? 실험수만 굉장히 많아지는거같가서 혼란스럽습니다..
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