실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
Trizol과 사용하는 시약들에 대한 궁금증이 있습니다.
레벨1 biochobo (대학원생)
안녕하세요 병아리 대학원생입니다.
요즘 트리졸을 공부하고 있었는데 이해가 가지 않는 부분에 대해 명확한 해결이 안되어 고수님들의 도움을 받고 싶습니다.
1. phenol은 궁극적으로 가장 메인 역할은 무엇입니까?
-> 공부를 해보니 페놀이 단백질을 녹이고 세포질을 파괴하며 pH를 산성으로 맞춘다는 것이 제대로 알고 있는 것이 맞는지요.. pH 4 정도에서는 DNA나 protein은 변성되어 aqueous층에 존재하지 않는다고 하는데 그렇다면 메인 역할은 pH완충이나 pH맞추는 역할을 하는 건가요?
2. 저희 실험실은 easyBlue라고 하는 trizol용액을 사용하고 있습니다. 단백질 변성제가 guanidinium thiocyanate말고도 머캅토에탄올과 디에틸 피로카보네이트가 들어가던데 단백질 변성하고자 하면 한가지 변성제를 써도 될 것 같은데 여러개를 사용하는 이유를 모르겠습니다. 변성제마다 단백질 변성에 대한 특징이 달라서 인가요??
3. pH가 결국 RNA와 DNA를 분리하는데 결정적인 역할을 하는 것으로 압니다. pH 4정도면 RNA는 멀쩡하지만 DNA는 변성되고 중성 pH가 되면 aqueous층에 DNA RNA 둘 다 존재한다고 알고있는데요, 제가 쓰는 easy blue라고 하는 제품이 BTB지시제가 들어있는데 ㅎ파란색입니다. 중성 pH인데 그럼 RNA를 뽑는게 아니고 RNA와 DNA모두 존재하는것이 아닌가요?
4. 위 질문과 이어서 DNA층이 중간층에 뽀얗게 나오는데 그건 왜 그렇게 뿌옇게 침전될 수 있는것이며 왜 중간층에 존재하나요?
5. 왜 RNA extract모을 때 침전시키는건 isopropylalcohol을 쓰고 DNA는 에탄올을 쓰나요? RNA도 에탄올 쓰거나 DNA도 아이소프로필알코올을 쓰면 안되는 건가요?
질문이 길고 투박해서 죄송합니다.. 너무 궁금합니다. 고수님들 께서 알려주시면 정말 감사하겠습니다.
늘 건강하세요.
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