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본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
우선 PCR 증폭 전 DNA를 전기영동 했을 경우 Band가 보이는지 부터 확인해야한다고 생각합니다. 그 후 band가 보인다면 primer 설계가 잘못돼었는지를 확인해 보셔야 할 듯 합니다. 그것또한 이상없다면 PCR 온도 및 Cycle 수도 체크해보아야 합니다. 모두 완벽하다면 제품 claim 진행하시면 될 듯합니다. 정보가 정확히 없어서 정확한 답변 어려운 것 양해 부탁 드립니다.
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레벨1
Soiw
(대학생)
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20.06.09 17:26
DNA는 좀 보이는데 PCR은 아예 안나타나더라구요.. 기기 이상은 없다는데 Primer 덜 넣어서 증폭이 제대로 안된게 이유가 될 수 있을까요..? 그거 말고는 러닝 시간 ? 정도밖에 원인요인이 없어보여서요..
정상적으로 PCR 을 해봐야지 어떤 원인 때문에 PCR이 안되었는지 알수
있을 것 같습니다.
PCR premix에는 primer가 안들어 있기 때문에 primer양 문제는 아닙니다.
primer가 조금 적더라도 반응은 진행되고 전원이 off되고 총 반응 cycle이
얼마나 진행되었는지에 따라 band가 나올수도 있고 안나올 수도 있습니다.
전원이 off되고나서 추가적인 cycle을 계속 진행했나요?
증폭 시간이 모자라서 안보일 가능성이 가장 클것 같습니다.
그리고 당연히 증폭 전 temp. DNA는 전기영동에서 확인 후 사용했겠죠.
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레벨1
Soiw
(대학생)
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20.06.09 19:51
아! 제가 잘못 적었는데 pcr 사이클은 제대로 돌렸는데 겔 전기영동 시간이 부족한 게 원인일 수 있는지 궁금했습니다! (헷갈리게 적어서 죄송합니다...) 전기영동에서 로딩후 '전압을 걸은 시간'이 부족해도 안나타날 수 있는 건가요?
알아보니 겔 농도나 전압에 따라 다르지만 30분에서 2시간까지 요구되는 시간이 다르더라구요. 샘플이 아래까지 다 내려갔는지 확인을 안하고 전기영동 40분 정도로 세팅값대로 진행했는데 이게 문제였나 싶습니다..
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VELL
(비회원)
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20.06.09 23:03
전기영동 진행한 시간은 크게 실험결과에 영향을 미치진 않습니다.
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레벨1
Soiw
(대학생)
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20.06.10 00:52
그런가요? 충분히 안내려가서 밴드가 안나타났나 싶었네요. 답변 주신 분들 모두 감사합니다!