[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
라이카써머캠프
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > Library
조회 181  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Phage display 후 insert가 deletion 되는것같습니다.
알LuvPit(대학원생)  | 06.05 14:26

Antibody를 screening 하기 위해서, pADL-20C vector에 nanobody 형태의 library를 제작하였습니다.

CDR3 부분을 random하게 하여 12~23개의 amino acid가 존재하도록 하였으며, 이는 colony PCR을 통해서 insert가 존재하는것을 확인했습니다.

현재는 sequencing을 진행하고 있는데, 분석이 안되는 것이 13개정도 존재하고, 중간에 stop codon이 존재하는게 15개정도, 나머지는 서열 분석이 되는것으로 보입니다. (아직 sequencing 진행중입니다.)

library size는 10^6 정도로 작지만, 실험을 익힐겸 panning을 진행하였으며, CM13 helper phage를 사용하여 진행하였습니다. 실험은 다른 랩실의 phage display를 하시는 분의 도움을 받아서 3 round까지 진행하였습니다.

 

phage ELISA (polyclonal ELISA)를 진행하였을 때 1-2 round에서보다 3 round에서 signal이 증가하는 것을 확인하였고, single colony로 풀어서 ELISA (monoclonal ELISA)를 하였을 때, 전부 (~200개 colony) background signal (흡광도 ~0.1)로 나타났습니다.

ELISA에 문제가 있었는지 확인하기 위해 colony PCR을 진행해본 결과, random하게 pick한 400 개의 colony 중에서 3개에서만 colony PCR인 진행되었습니다.

Vector prep을 하였을 때는 모두 vector는 존재하였지만, size나 sequencing을 하였을 때 insert가 전부 없던지, insert 포함 앞 뒤로 조금씩 비어있는 결과가 확인되었습니다.

 

이러한 현상으로 인하여 모든 실험이 멈춰져 있는 상태입니다..

저와 같은 경험이 있으시거나, 원인 또는 해결 방안을 알고계시는 분이 계시면 답변 부탁드리겠습니다.

#phage display
 
#panning
답변하기
첫 댓글을 달아주세요.첫 답변을 달아주세요.
답변하기
할인행사 광고 검색광고
다온비에스 다온비에스
[DNAGenotek] Oragene Collection kit 무료샘플 사용해보세요!! (7.31까지)
다온비에스 다온비에스
[DNAGenotek] Omnigene·GUT Collection Kit 무료샘플 사용해보세요!! (7.31까지)
브래디 브래디
초저온라벨 등 실험실용 풀칼라프린터 (COVID-19 안전사인 지원) (8.30까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
High Multiplex RNA/Protein Expression Analysis System / taco.. (12.24까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Reading과 형광 Imaging을 하나의 장비로 한 번에!! [Multi-mode micr.. (8.31까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 상반기 프로모션 안내 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (8.8까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
4/6  좌우
482,000
92,30087,700
6,000
17,000
23,000
66,50063,200
93,20088,600
739,000702,100
47,20044,900
79,50075,600
136,000129,200
468,000
130,500124,000
125,500119,300
139,000132,100
109,000
339,400322,500
493,000
49,000
52,60050,000
370,000
773,000734,400
143,800136,700
482,000
최근등록   더보기 >
Multiple reference genes   07.11
DNA Similarity   07.10
western bolt 단백질띠가 안보여요 ㅠㅠ   07.10
피부병 치료 가능여부를 판단할 수 있는 실험을 설계하고 싶습니다!   07.10
caco-2 cell morphology 변화- 포도송이모양   07.10
고등학생 플라보노이드 에탄올 추출법   07.10
his-tag 정제 중 non-specific 밴드 elution 때문에 질문드립니다.   07.10
혈액(혈장,혈청)샘플 사용에 관해 궁금한 것이 있습니다.   07.10
습윤 드레싱 연구에서 water absorption/donation에 대해서 설명해주세요   07.10
세균 배양 외에 세균 번식 정도를 확인할 수 있는 실험   07.10
울산대학교 의과대학
제품평가
[비아이코퍼레이션]
e브릭몰(연구용 제품 온라인 구매 사이트)
비아이코퍼레이션
모집인원: 50명
모집기간: ~7/15까지
신청조건: BRIC 회원
평가자 혜택

- 참가자 전원 3만원 상품권 제공

제품평가자 모집중
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크