실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
Taq polymerase와 pfu polymerase
레벨1 분자진단초보 (대학원생)
같은 template(cDNA)로 같은 primer를 사용하여 PCR을 하는데, Taq polymerase(master mix)로는 PCR이 되는데, pfu polymerase(mastermix 아님)로 PCR 할 때는 PCR이 되지 않습니다.
recombinant protein template로 사용할 것이기 때문에 pfu polymerase로 PCR이 되어야하는데 volume을 50 uL와 20 uL로 조절해봐도 나오지 않고,
각 cycle의 시간이 initial denaturation (2 min), denaturation(20 sec), annealing(10 sec), extension (1 min), fianl extension (5 min) 으로 실험했을 때 증폭이 되지 않아 시간이 너무 짧은가 싶어서, denaturation과 annealing 시간을 1분으로 늘려서 진행해 보아도 나오지 않았네요..
template (cDNA)농도도 995.8 ng정도라서 거의 1ug이라서 적절한 농도라고 생각되고, 690 b.p 정도라서 extension time도 충분하고, primer 농도도 10 pmoles로 사용해서 충분했다고 생각되는데,,,
무슨 이유에서 Taq polymerase로는 PCR이 되고 pfu polymerase로는 PCR이 안될까요,,,?
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