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질문 세균 성장곡선 측정
알잉뀨(대학생)  | 06.03 13:24

안녕하세요 학부생연구원으로 실험실에 다니는 대학생입니다.

저는 주로 세균의 성장곡선을 측정하고 이를 활용하는 방법에 대해 실험하는데요

보통 실험 전날 오후 6시쯤에 세균을 배양해두고 16-17시간 overnight 후 오전 10시쯤에 꺼내서 사용하는데 제 실험이 세균 수에 민감한 실험이라서 배양 후에 세포 수를 유지시킬 수 있는 방법이 있을지 궁금합니다.

저는 원심분리로 cell down 시키고 배지를 제거한 후 생리식염수에 현탁시켜두면 영양분이 없으니 세균이 자라지 않을것이라고 생각했는데, 생리식염수에 현탁시켜두고 점심을 먹고 3시간 정도 후에 실험을 하니 결과를 볼 때 세균 수가 더 증가한 것으로 확인되었습니다.

제가 생각한 다른 방법은 실험을 즉시 진행하지 않는다면 4℃ 냉장고에 잠시 보관했다가 사용하는 방법인데, 온도변화때문에 세균이 죽어서 세균수가 변하지 않을까 걱정입니다.

 

#세균
 
#온도
 
#세균 성장
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  06.03 13:46  

배양 후 cfu/ml는 어떻게 즉시 계산하나요?

배지를 제거해도 cell 내에 들어온 영양분으로 일정시간 성장을계속합니다.

cell이 살아 있으면서 완전히 성장을 멈추게 하는 방법은 없고 성장을 천천히

시키면서 보관하면 해당 균을 바로 사용하여 실험하는 것은 적절하지 못합니다.

가장 좋은 것은 실험에 필요한 균수를 바로 측정해서 필요한 균수많큼만 사용

하는 것입니다.

알잉뀨  |  06.03 14:11  

/SPEED

저는 이 논문

Hazan, Ronen, et al. "A method for high throughput determination of viable bacteria cell counts in 96-well plates." BMC microbiology 12.1 (2012): 259.

을 참고해서 96well plate에서 microplate reader로 세균 성장곡선을 측정하고 초기 세포 수를 계산하는 방법을 사용하고 있습니다.

 

저도 되도록 바로 실험에 사용할려고 생각하고 있는데, 만일 4℃에 3시간정도 보관한다면 세균이 살아있는 상태로 성장만 중지시킬 수 있지 않을까요?

대왕개구리SPEED  |  06.03 14:17  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

4도에 보관하면 실온보다는 성장이 억제되지만 100%는 아닙니다.

가장 좋은 것은 실험에 사용하는 미생물의 OD : cfu/ml의 공식을 구하면

항상 일정한 cfu/ml을 실험에 사용할 수 있습니다.

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