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질문 QPCR 결과
알kikipe(과기인)  | 06.02 18:40

mRNA와 miRNA expression level 을 비교하기 위해 QPCR을 했습니다. 

먼저, primer를 논문 및 프로그램을 이용해 제작했고 QPCR을 했습니다.

결과가 아래와 같이 나왔는데, primer가 잘 짜여져서 PCR 증폭이 잘 된 것인지, amplification plot과  melt curve가 잘 나온것인지 알고 싶습니다. 

1) amplification plot이 전체적으로 저렇게 나오는 게 이상없는 것인지

또한 맨 마지막 보라색은 왜 저렇게 나오는 것인지

2) melt curve의 peak은 각각 하나씩인데 하나당 선이 몇개씩 나와도 괜찮은지.

3) 각각 샘플마다 Tm 값이 다른데 77~78도로 낮게 나와도 되는 것인지.... 등등

이 결과를 본 후 primer selection과 PCR 조건을 잡아서 실험을 진행해야 하는데 물어볼 데가 없어요.

답변 부탁드려요. ㅜㅜ

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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이BlackSmile  |  06.03 18:05  

음...qPCR은 서로 다른 sample을 duplicate로 진행하셨는지 우선 답변을 부탁드리고,

여기서 지금 드릴 수 있는 답변만 하자면

 

1. 맨 마지막 보라색은 왜 저렇게 나오는가?

Sample mix를 qPCR tube에 넣을 때 bubble이 심하게 생겼다거나, 아니면 가끔씩 tube의 표면에 무언가가 묻어서 형광을 이상하게 detect하는 경우가 가끔 있습니다.

 

2. melt curve의 peak는 하나인데, 하나당 선이 여러개 나온다

하나당 선이 몇개씩 나온다는게 그림에서 어느 선을 말씀하시는건가요?

 

3. 그림 속 melt curve는 동일한 primer를 서로 다른 sample에 사용한 결과인가요? 아니면 서로 다른 target gene의 primer를 이용하여 qPCR을 진행한 결과인가요?

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