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 전체 > Chemical biology
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질문 Bradford Assay 방정식 질문
알ffjkqwj12313(대학생)  | 06.01 23:17

 bradford assay 결과 표준곡선을 만들었을시

y=ax+b가나오는데

이때 b값은 뭘뜻하는건가요

예를들어 단백질 농도(X)가 0일때 흡광도(y)값이 0이아니라 0.3(b값) 이렇게나온다고 치면 b값이 뭔지 모르겠어요

#Bradford assay
 
#흡광도
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알Chummy  |  06.01 23:41  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
많은 선형 회귀에서 쓰이는 기본적인 추세선, 적으신 것 그대로 일차 회귀에서는 직선 방정식 꼴로 나타내어 집니다.. 농도 스캐터들이 한 직선으로 표현되기 위해 정해지는 상수값 정도로 이해하시면 편하실 것 같습니다...
알ffjkqwj12313  |  06.01 23:46  

답변해주신 내용 감사드립니다.

 

그런데 단백질의 농도가 0일때 흡광도가 0이 아닌이유 또한 궁금해서 질문드립니다

알Chummy  |  06.02 00:05  

우선 제가 전공자도 아니고 지식이 짧은 탓이 정확한 답변이 되지 않을 것 같아 걱정이 됩니다만 몇자 적습니다.

추세선은 말 그대로 추세선이고, 해당 assay의 모든 결과를 대표하진 않습니다. 그래서 같이 기술되는 것이 신뢰도인 R^2이죠. R^2가 1에 가까울수록 해당 추세선이 표준곡선을 어느 정도 보장한다고 표현할 수 있습니다.

저는 보통 bca assay를 많이 수행합니다만 분석적인 측면에서는 bradford도 비슷할꺼라 생각합니다. 스캐터들을 플로팅할 때 blank인 농도 0에서의 값을 측정한 농도 구간의 흡광도에서 모두 빼줍니다. 그리고 추세선을 그리게 되는데요. 실제로 작성자분께서 적어주신 b값은 0에 가까운 값을 보이게 됩니다. 하지만 정확한 0으로 되는 경우는 제가 경험해보지 못한 것 같아요. 0 이외의 다른 스캐터들을 보정해야하기 때문에 적당한 상수인 b가 뒤에 빼지거나 붙게 되는 것이지요.

알Chummy  |  06.02 00:14  
조금더 붙여서 답글을 달자면... b라는 값에 너무 의미를 두지 않으셨으면 합니다..ㅎㅎ b는 0이 될수도 음이 될수도 양이 될수도 있는 단순 선형 회귀의 값에 불과하다는 거니깐요.
개구리명품남자  |  06.04 14:38  

bradford 시약자체가 갖는 흡광도값이 b입니다.

그렇기에 blank (시약만 넣어준 것)이 필요하며 해당 값을 전체 값에서 빼줘야 합니다.

 

또한 질문과는 관련없지만, r^2 값이 0.99(또는 0.995)이상 되게끔 standard 농도를 맞춰줘야합니다. 

쉽게말해 sample의 측정된 흡광도 값이 standard의 직선부위내에 존재하게끔 농도를 맞춰 loading해줘야합니다.

경험이 적은 대학원생들이 포화되어 곡선화 되어있는 standard curve를 이용해 농도계산을 해서 전혀 엉뚱한 결과를 창출하는 경우도 있기에 말씀드립니다.

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