실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
BCA assay 질문 드립니다.
레벨1 Chummy (대학원생)
안녕하세요.
BCA assay 관련해서 문의를 드리려고 합니다.
Thermo 사에서 판매하는 Pierce BCA protein assay kit로 primary cell의 단백질을 정량하고 있는데요.
Lysis buffer는 RIPA buffer를 사용하고 있습니다.
실험 컨셉상 PBS로 cell-down 시킨 후 lysis 하지 않고, dish 위에서 바로 lysis 하고 있구요.
문제는 BCA assay standard curve를 해석하는 것 자체에서 조금 혼돈이 와서 문의를 드립니다..
1) Sample이든 standard든 동일 부피 (10 ul)를 WR 200ul에 반응시킵니다.
Standard로 매우 이쁘게 잘 그려지고요. 문제는 여기서부터입니다. BRIC의 여러 댓글들을 보니,
-> sample을 10 ul 사용하였기 때문에 역추정되는 x ug 를 10으로 나눠준 것이 실제 sample의 농도임... (이해가 안가는 부분은, 역추정한 값 자체가 x ug/mL 단위의 농도가 아닌가요?... 근데 이런 댓글들이 많이 보여서 너무 혼란스럽습니다)
-> 그게 아니라 말 그대로 standard 대비 역추정 한 x ug/mL이 당신이 현재 가지고 있는 sample의 농도임. (이게 제가 지금 이해하고 있었던 바인데, 샘플이 포함된 lysis buffer를 예를 들어 100 ul 가지고 있고 추정된 값이 500ug/mL라면 50ug/100uL의 단백질을 가지고 있는 것입니다)
다음과 같이 두 개의 문제에 좀 부딪혀서 고수분들에게 질문을 드리고 싶습니다.
길이 좀 길고 잘 정리하지 못해서 죄송합니다.
감사합니다.
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