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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 BCA assay 질문 드립니다.
알Chummy(대학원생)  | 06.01 20:24

안녕하세요.

BCA assay 관련해서 문의를 드리려고 합니다.

Thermo 사에서 판매하는 Pierce BCA protein assay kit로 primary cell의 단백질을 정량하고 있는데요.

Lysis buffer는 RIPA buffer를 사용하고 있습니다.

실험 컨셉상 PBS로 cell-down 시킨 후 lysis 하지 않고, dish 위에서 바로 lysis 하고 있구요.

문제는 BCA assay standard curve를 해석하는 것 자체에서 조금 혼돈이 와서 문의를 드립니다..

1) Sample이든 standard든 동일 부피 (10 ul)를 WR 200ul에 반응시킵니다.
Standard로 매우 이쁘게 잘 그려지고요. 문제는 여기서부터입니다. BRIC의 여러 댓글들을 보니,
-> sample을 10 ul 사용하였기 때문에 역추정되는 x ug 를 10으로 나눠준 것이 실제 sample의 농도임... (이해가 안가는 부분은, 역추정한 값 자체가 x ug/mL 단위의 농도가 아닌가요?... 근데 이런 댓글들이 많이 보여서 너무 혼란스럽습니다)
-> 그게 아니라 말 그대로 standard 대비 역추정 한 x ug/mL이 당신이 현재 가지고 있는 sample의 농도임. (이게 제가 지금 이해하고 있었던 바인데, 샘플이 포함된 lysis buffer를 예를 들어 100 ul 가지고 있고 추정된 값이 500ug/mL라면 50ug/100uL의 단백질을 가지고 있는 것입니다)

다음과 같이 두 개의 문제에 좀 부딪혀서 고수분들에게 질문을 드리고 싶습니다.

길이 좀 길고 잘 정리하지 못해서 죄송합니다.

감사합니다.

#protein quantification
 
#bca assay
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  06.01 20:43  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

뭐가 문제인가요?

std와 sample의 부피를 동일하게 반응시켜 std의 회귀곡선에 sample값을

대입하면 됩니다.

단위는 std와 동일합니다.

std의 농도가 ug/ml면 시료 농도 역시 ug/ml이 됩니다.

알Chummy  |  06.01 20:52  
Speed 연구원님,

글이 장황하여 무슨 말인지 잘 모르셨죠?
Speed 연구원님 말씀대로 아무 문제 없이 해석해오다가, 10ul를 wr에 반응시켰기 때문에 추정한 값인 x ug/ml에 10을 나눠라 하는 댓글을 봐서 혼돈이 와 글을 작성하게 되었습니다...^^
지나가다..  |  06.03 12:18   

이런 질문을 할때는 본인이 나온 실험의 결과값을 바탕으로 어떻게 해석했는지, 혼돈이 오는 부분이 어디인지 적어주셔야 명확하게 답변이 가능하죠. 

글이 눈에 잘 들어오지가 않네요.. 

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