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질문 NO assay 저해제가 작동하지 않아요 ㅠㅠ
앞다리soi(대학원생)  | 06.01 15:50

bioactive 펩타이드로 NO assay 를 하고 있습니다. 

실험조건은 

96well에 10만개, RAW264.7, LPS 1ug/mL, 샘플-LPS 동시 처리후 24시간 배양하였고, 사용된 배지는 phenol red 포함한 DMEM입니다.

결과를 말씀드리면,control에 비해  LPS를 넣은 경우 NO 생성이 5-8배 증가하였습니다. 문제는 처리한 펩타이드 (~500ug/mL)의 NO 저해가 전혀 효과가 없었습니다. 

Q1. phenol red가   griess시약의 발색과 유사하여 phenol red없는 배지를 써야 한다는 말이 많던데, 생각해 보면  LPS를 처리하지 않은 control에도 phenol red가 들어가기 때문에 굳이 phenol red가 안들어간 배지를 사용해야 할까요?

Q2. 문헌에서 10ug/mL에서 항염 효능이 있다고 되어 있는 펩타이드인데도 500ug/mL 에서조차 전혀 저해능이 없었습니다. 뭐가 문제일까요? 

LPS에 의해 RAW cell이 activation되어 끄덕도 없는걸까요.. 이 펩타이드를 positive control로 생각하고 진행한건데,, 전혀 효능이 보이지 않아 당황스럽습니다. 혹시 positive control로 사용하는 항염 펩타이드가 있다면 추천 부탁드립니다.

 

 

#NO assay
 
#phenol red
 
#peptide
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  06.01 15:55  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

cell은 문제가 없어 보입니다.

이런 실험은 동시 처리 보다..

1. peptide를 먼저 처리 후 LPS를 처리

2. LPS를 먼저 처리 후 peptide를 처리해 보세요.

1, 2의 mechanism이 다릅니다.

앞다리soi  |  06.01 18:08  

스피드님 답변 감사합니다. 참고하겠습니다.

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