실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Transformation
Transformation, Blue/White selection
레벨1 hoit (대학생)
학교에서 Transformation 결과로 Blue/White selection을 진행했습니다. 방법은 아래와 같았는데 결과가 예상과는 너무 다르게 나왔습니다.
실험에서 사용한 플라스미드는 가장 보편적인 '엠피실린 저항성 유전자-lac Z 유전자를 가진 플라스미드'였습니다.
- 실험방법 -
1. Competent cell (100ul)에 plasmid 10ul을 모두 넣고 Ice에 15분간 둔다.
2. Heat shock : 42'C water bath에 90초간 두고 다시 Ice에 5분간 둔다.
3. IPTG (10ul), X-gal (40ul)을 ampicillin plate에 떨어뜨리고 도말한 후 만들어놓았던 comcell 60-70ul을 plate에 도말한다.
4. 37'C 배양기에 12시간 이상 둔다.
결과는 colony가 매우 적은 수만 나왔고 그 colony들은 white colony였습니다. blue colony가 없고 colony 수 자체도 매우 적다는 문제점이 나타났습니다.
그런데 다른 조는 실험방법 중 1번에서 comcell을 50ul만큼, 3에서 comcell을 40ul만큼 넣어서 실험에 성공했습니다.
comcell 용량을 줄인 것이 실험에 어떤 영향을 끼쳤는지가 궁금합니다.
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