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질문 plasmid region
알ㅎ하ㅏㅇㅇ(대학생)  | 05.30 15:24

pCMV6-Entry vector 에서 region 중에

Neo r / Kan r 도 포함되는건가요? 아무리 검색해도 얘네랑 관련된 내용이 없길래 질문해봅니다ㅠㅠ 포함된다면 무슨 기능을 하나요?

그리고 Sgf1 같은 저것들도 포함되는건가요...?

 

 

#vector
 
#plasmid
 
#neo r / kan r
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  05.30 15:29  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Neo+/Kan+ gene이 있습니다.

그리고 sgf I은 제한효소이고 kozak 서열에 잘리는자리가 있습니다.

개구리무광  |  05.30 16:07  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

neomycin resistance 

kanamycin resistance

해당 약물에 저항성을 부여합니다.

알ㅎ하ㅏㅇㅇ  |  05.30 16:54  

정말 감사합니다.

ddk 랑 myc는 또 뭔가요ㅠㅠ? 학부생 2학년이라 잘 몰라서 찾아보려는데 인터넷에 뜨는게 별로 없네요ㅠㅠㅠ 이것 또한 플라스미드에 region 인가요 ? 무슨 역할을 할까요ㅠ?

허접한 질문 죄송합니다ㅠㅠ

대왕개구리SPEED  |  05.30 17:13  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

myc와 DDK(FLAG)는 발현 단백질의 정제 또는 확인을 위한 Tag으로 이용하기

위해서 붙여놓은 부분입니다.

myc 항체, DDK 항체를 사용하면 각각의 부위에 결합을 합니다.

개구리무광  |  05.30 17:21  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

여기에선 myc-tag, ddk-tag 입니다.
codon을 맞춰서 insert를 넣으면 같이 전사되고 결국 하나의 단백질로 연결(fusion protein) 번역됩니다.

이 plasmid의 경우는
ex) N terminal-target protein-myctag-ddktag-stop C terminal

tag-fusion protein은 검출할 때 (웨스턴블럿, immunofluorescence 등)
target protein의 antibody 말고도 해당 tag의 antibody가 사용가능합니다

plasmid 처음 공부하려면 밑의 무료자료 추천 드립니다.
하단부의 ebook 다운로드 가능합니다

https://blog.addgene.org/plasmids-101-what-is-a-plasmid

대왕개구리강시  |  05.31 13:29  

네오마이신은 진핵생물에 주로 사용되므로 SV40 프로모토로 발현시킵니다.

카나마이신은 세균에 사용되므로 세균에서 사용되는 프로모터 (이 벡터에서는 아마 Amp 마커의 프로모터?) 를 사용합니다.

이 벡터에서는 이 두 프로모터로 발현되는 하나의 orf 가 있는데 발현되는 단백질은 어느 프로모터로 발현되든 하나의 단백질이며 카나마이신과 네오마이신 들 다 작용합니다. 

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