실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
overlap pcr primer 질문드립니다.
레벨1 한파인 (대학생)
두 유전자를 연결하기 위해 overlapping PCR을 수행하려고 primer를 디자인하고 있습니다.
제가 짠 프라이머는 아래와 같은데
F overlap primer: ctc cca ata aag act tct ttt cct gat gga gag ttt a
R overlap primer: t aaa ctc tcc atc agg aaa aga agt ctt tat tgg gag
1. 위의 F overlap Primer에서 밑줄치지 않은 부분은 앞쪽 유전자의 3' 말단부분이고 밑줄친 부분은 뒤쪽 유전자의 5' 말단부분입니다. overlap PCR의 프라이머는 이렇게 디자인하는 것이 맞나요?
그리고 Tm값을 계산할 때 밑줄치지 않은 부분의 염기쌍만을 가지고 Tm값을 계산하는건 아니죠?ㅠㅠ
2. 전체를 가지고 Tm값을 계산하면 너무 값이 커지는데 20bp 정도 되는 Forward Primer와 Reverse Primer 가 Reverse overlap Primer 그리고 Forward overlap Primer와 Tm 값을 어떻게 맞춰야되는지 궁금합니다.
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