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질문 western(sds-page gel) 질문
알ㅇ형광펜ㅇ(대학생)  | 05.27 22:09
Western울 계속연습하고있는 석사준비생입니다.


최근 밴드가 휘거나 사라지는일이 생겨 gel을 만드는 과정에 문제가있나싶어 고민하고있던 중 교수님이 running gel을 굳힐때 위에 isopropanol을 많이넣어 보라하셔서 200ul넣던 isopropanol을 1ml 넣고 굳혀보았습니다.

25분 굳힌뒤 dw로 충분히 washing 시켜주었고, 세로로 기울여 3m paper로 잔여 dw까지 모두 흡수시킨 후 stacking gel을 넣어주었는데 굳고난 후 보니 stacking gel과 runnung gel 사이에 0.1-2cm정도의 층이 생겨있었습니다.

혹시 isopropanol이나 dw가 남아있어 층이생긴것일까해 만져보면 알까싶어 만든 2장중 1장을 뜯어보았는데 사이의 층은 물이 사이에꼈다기엔 running gel에 가까운 강도였습니다.

대체이게 뭘까요??

왠지 이 gel에 sample을 내리면 안될것같은데 뭐가 잘못된건지 도통 모르겠습니다 살려주세요ㅠㅠ
#Western
 
#SDS-PAGE
 
#gel
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  05.27 22:52  

running gel에 overlay 할때 너무 세게해서 그렇습니다.

천천히 해보세요.

알ㅇ형광펜ㅇ  |  05.28 07:59  
running gel에 Isopropanol을 세게넣어서 그렇다는건가요???
대왕개구리SPEED  |  05.28 10:02  

DW, iPA 모두 사용가능한데 천천히 넣어야 층이 무너지지 않습니다.

지나가다..  |  05.28 13:02   

지금 문제는요.. 전기영동하는 밴드가 휘거나 이상하게 되는게 문제이지, gel에 무슨 층이 생겼다? 이건 아니죠. 

 

Gel의 band가 휘는 이유는 

1) 고전압으로 인한 열 발생 

2) gel의 조성 문제

3) 버퍼 조성 문제

 

크게 이렇게 3개 문제입니다. isopropanol 많이 넣으라는게 말라서 날라가면 gel이 굳으니 그렇게 하라고 한건데, 200 넣던걸 1ml넣어도 별 차이 없고, DW넣어도 차이 없습니다. 

 

gel을 만들기 위해 사용한 시약, Running버퍼도 점검해보시구요. Western blot 전압 조건도 다시 살펴보세요

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