실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
western blot band
레벨1 5렌지 (대학원생)
안녕하세요 western blot 연습중인 학생입니다.
10% gel 로 만들어서 단백질을 loading 하여 베타액틴을 확인하는 연습을 해보고 있습니다...
먼저 buffer 같은 시약들은 모두 판매되는 제품을 사용해서 이상이 없구요
가르쳐주시는 선생님과 같이 할땐 밴드가 나오는데 왜 혼자하면 밴드가 나타나질 않는지 너무 답답합니다..
같은 sample, 같은 방법으로 했는데 제가 혼자 하면 안돼요 ㅠㅠ
이번에 한 결과는 size marker 조차 퍼지고 색이 파란색으로 나왔습니다 (bio-rad)
antibody overnight 과정에서 색이 변한 것 같아요
또한 파란색 선이 보이구요 선은 SDS PAGE 과정부터 생겼습니다.
거의 4번째 밴드가 안뜨는데 너무 답답합니다..
베타액틴은 대충해도 그냥 나온다던데 왜 저는 안될까요..
도와주세요..
+ SDS PAGE 할때 베타 액틴 사이즈가 중간정도 와서 sample buffer 가 밑에 쯤 내려 왔을때 뺏습니다.(약40분120V) 그랬더니 중간부분 크기여야할 size marker 표시가 위에 위치했습니다. 1시간할땐 그러지 않았습니다. SDS PAGE 가 분자량에 따라 분리가 되는 건데 위에서 분자량에 따라 나눠졌을 텐데 running 시간이 짧아서 분리가 덜 됐다고 봐야할까요?
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