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 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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질문 raw 264.7 cell culture 관련 질문입니다.
알으악..(대학원생)  | 05.27 04:24

안녕하세요 raw 264.7 세포를 처음 키워보는 석사 1년차 입니다.

저희 랩에서는 전에 사수가 raw cell을 0.05% 트립신을 처리해 pipetting으로 때어내서 실험을 진행하였습니다. 

제가 실험할경우도 pbs로 wash후 트립신을 처리해서 0.05% 트립신을 처리해서 세포를 때어 낼려고했으나 pipetting을 해도 cell 절반이상이 바닥에 붙어있는것을 육안으로 확인했습니다. 일반 상피세포를 키운적이있었는데 pipetting을 raw cell 처럼 수차례 한적은 단 한번도 없었습니다. 또한 교수님께 조언을 구했지만 트립신을 좀더 길게 처리하라는 답변 뿐이였습니다.

cell culture 경우 계대배양 주기는 48~60시간 사이에서 70-90프로 세포가 차있을때 진행했습니다.

그래서 cell culture 방법이 잘못되었나 해서 찾아보니 스크래퍼나 pipetting으로 때어내신다고 답변들이 주로 달려있었습니다. 여기서 저는 의문입니다.

1.  트립신을 처리하지 않고 pipetting으로 세포를 때어내면 물리적으로 손상이 가해질텐데 activation (동그란모양 아닌 가지형태)이 되는것은 아닌가요?

2. activation된 raw cell 가 많을 경우 잘 안떨어질수 있나요?

3. 스크래퍼로 긁어내는 방법을 제외 하고 raw cell을 계대배양 하는방법이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다.

 

#raw 264.7
 
#cell culture
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이이예이  |  05.27 10:32  

RAW264.7 cell의 경우 ATCC 홈페이지에 스크래퍼를 이용하여 subculture 하는 것으로 나와있습니다.

https://www.atcc.org/Products/All/TIB-71.aspx#culturemethod

제 경험상 스크래퍼로 긁어 subculture하여서 다음 계대에 cell morphology가 변화되는 것은 거의 관찰하지 못하였습니다.

trypsin으로 잘 떨어지지 않는 cell을 trypsin을 오래 처리하거나 높은 농도로 처리하는 것이 오히려 cell에 demage를 입힐 것 같네요.

cell이 activation 되는 경우는 오히려 media 조성이나 passage에 더 큰 영향을 받는 것 같습니다. 20 passage 이상 사용하지 않는다는 얘기를 들어봤던 것 같네요.

 

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