실험 Q&A Cell Biology > Cell Culture
raw 264.7 cell culture 관련 질문입니다.
레벨1 으악.. (대학원생)
안녕하세요 raw 264.7 세포를 처음 키워보는 석사 1년차 입니다.
저희 랩에서는 전에 사수가 raw cell을 0.05% 트립신을 처리해 pipetting으로 때어내서 실험을 진행하였습니다.
제가 실험할경우도 pbs로 wash후 트립신을 처리해서 0.05% 트립신을 처리해서 세포를 때어 낼려고했으나 pipetting을 해도 cell 절반이상이 바닥에 붙어있는것을 육안으로 확인했습니다. 일반 상피세포를 키운적이있었는데 pipetting을 raw cell 처럼 수차례 한적은 단 한번도 없었습니다. 또한 교수님께 조언을 구했지만 트립신을 좀더 길게 처리하라는 답변 뿐이였습니다.
cell culture 경우 계대배양 주기는 48~60시간 사이에서 70-90프로 세포가 차있을때 진행했습니다.
그래서 cell culture 방법이 잘못되었나 해서 찾아보니 스크래퍼나 pipetting으로 때어내신다고 답변들이 주로 달려있었습니다. 여기서 저는 의문입니다.
1. 트립신을 처리하지 않고 pipetting으로 세포를 때어내면 물리적으로 손상이 가해질텐데 activation (동그란모양 아닌 가지형태)이 되는것은 아닌가요?
2. activation된 raw cell 가 많을 경우 잘 안떨어질수 있나요?
3. 스크래퍼로 긁어내는 방법을 제외 하고 raw cell을 계대배양 하는방법이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다.
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