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질문 mycoplasma 오염된걸까요?(DAPI사진있음)
올챙이ddw604(대학원생)  | 05.26 16:39

upload_image

SW480 , DAPI , 100배 관찰한 것입니다.

배지는  DMEM(with phenol red, FBS, 항생제 P/S) 사용하고

하루만 지나도 배지가 뿌옇게 되고, 가루(?) 같은 것이 떠다닙니다.

cell harvest후 centrifuge하면 pellet 거의 없고 배지에서 시큼한 냄새도 나는 듯 합니다...

그리고 저 세포 말고도 Amphotericin 넣은 배지 사용한 세포도 마찬가지로 같은 현상입니다.

DAPI염색으로도 오염된 것을 확인 할 수 있다해서 해봤는데

핵 주변에 저렇게 보이는것이 오염이 된 것인지..

그리고 오염된 것이 맞다면 인큐베이터 청소는 어떤식으로 하는게 좋은지?

배지랑 PBS버리고 클린벤치 안에 있는 피펫팁이랑 e-tube다시 오토클레이브 돌리면 괜찮은지.. 등등 조언 구합니다 ㅠㅠ

#mycoplasma
 
#contamination
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리무광  |  05.26 16:55  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

DAPI 염색사진으로는 저도 mycoplasma가 의심되긴 하네요.
PCR 돌려보면 더 확실할 거 같긴한데 

질문자님의 cell만 그런가요? 아니면
Lab 전체 cell(다른 랩멤버의)도 비슷한 현상이 나타나나요?

mycoplasma가 한번 광범위하게 번지면 정말 완벽히 제거하기 까다롭긴한데

원인모를 mycoplasma contam이 의심되면
일단 사용한 모든 medium, buffer는 폐기하시고 새로 만드시고
기구들은 멸균처리를 다시 해야합니다
클린벤치는 물건 다 빼고 UV를 오래 켜두세요.

P/S나 amphotericin은 mycoplsama 제거에 효과가 없고
일주일 정도 MC-210이라는 시약 처리하시면 제거가능합니다. (한국에도 파는 지 모르겠네요)
 

올챙이ddw604  |  05.26 16:59  

답변감사합니다.

저 세포 말고도 같은 incubator에 있는 거의 대부분의 세포들이

같은 현상이 나타나고 있습니다.( DAPI 염색은 안해봤지만..)
조언해주신대로 해보겠습니다..감사합니다!

개구리bio  |  05.28 00:50  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

현미경 사진으로는 확실하지 않은데요..

저는 이것을 사용합니다. 

https://bioscience.lonza.com/lonza_bs/CH/en/Cell-analysis/p/000000000000186462/MycoAlert-Mycoplasma-Detection-Kit-%2810-Tests%29?_bt=283686257443&_bk=%2Blonza+%2Bmycoplasma+%2Bkit&_bm=b&_bn=g&_bg=60821050510&gclid=EAIaIQobChMIg9eox7HU6QIVAo_ICh0SwgISEAAYASAAEgIG1fD_BwE

그리고 오염이 되었다면 현재 사용하고 있는 모든 것들 다 버리고 incubator 와 TC hood는 bleach로 잘 청소해주어야 합니다. 

마지막으로 

많은 연구자들의 착각이 mycoplasma를 처리할 수 있다는 생각입니다. 

현재 나와있는 제품들이 대부분 mycoplasma를 한시적으로 억제만 시켜 주는 것이지 완전하게 죽이지는 못해요.. 나중에 더 큰 문제가 생깁니다. 

mycoplasma에 제일 확실한 방법은 bleach를 사용하는 것이고 그렇지않는한 불가능합니다. 

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