실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
단백질 refolding 관련하여 조언을 구합니다.
레벨1 밥술이 (대학원생)
안녕하세요. 현재 석사과정 중에 있는 대학원생입니다.
조언을 구하고자 글을 올립니다.
제가 현재 8M urea를 이용하여 단백질 정제를 진행하였구요.
이제 urea를 이용하여 dialysis 를 통해 단백질을 refolding 해야 하는 과정에 있
습니다. 제가 궁금한것은.
Q1: 몇몰의 Urea 부터 dialysis를 진행하는 것이 좋나요?
- 저는 4M,3M,2M,1M,0.5M,0M 순으로 진행을 하였었는데. 다른 몰수에서는 단백질이 원하는 밴드에 떴는데 0M 에서 단백질이 나오지 않아서 실패했습니다.
Q2: dialysis를 진행하는 buffer의 양은 어느정도가 적당한가요? 너무 많아도 안된다고 알고있는데 저는 1L의 buffer로 진행을 하였습니다. 그결과 자꾸 단백질이 aggregation되더라구요...
Q3: dialysis를 진행하는 시간은 어느정도가 좋을까요? 저는 4시간 또는 over night으로 진행을 하였었습니다.
이밖에도 refolding 에 관한 조언을 해주시면 좋겠습니다. ㅠㅠ
제가 잘 몰라서 엄두가 나질 않습니다ㅠㅠ 답변해주시면 감사드리겠습니다.
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