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질문 glycerol stock 질문드립니다.
알Qwerty9876(대학생)  | 05.25 15:32
보통 glycerol을 최종 볼륨에 20% 농도로 쓴다고 들었습니다.

1. 그렇다면 배지에 키운 균주 900 ul + 50% glycerol 500 ul 를 섞으면 얼추 농도가 15~20정도 되는데 이정도면 괜찮은 비율일까요?

2. 기존에는 균주 500 ul + 50% glycerol 500 ul하여 total 농도를 25%로 맞추었는데 너무 고농도로 보관하고 있는것일까요? 확인해보니 -80도에서 잘 얼어있긴 합니다만..

3. 건강한 균주를 보관하는걸로 알고있습다. 그렇다면 OD 0.6에서 스탁을 만들어야 할텐데, O/N을 한 균주로 스탁을 만드는 이유가 있을까요?

실제 다른 랩실분들은 어떻게 보관하고 계신지 궁금하여 질문드립니다. 감사합니다.
#glycerol stock
 
#store
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리CHINyo76_philekorea  |  05.25 16:05  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

보통은 final 15% glycerol에 보관하는데 20-25%에 보관하는 경우도 있는 걸로 알고 있어요. 큰 문제는 아닐것 같습니다. 

건강한 균주라는 것은 cell growth가 가장 활성화되어 있는 시기로 볼 수 있겠으나 cell wall이 unstable할 수 있습니다. 그래서 o/n (E. coli 기준)으로 cell wall 이 stable하고 cell 수도 확보될 수 있도록 하는 것으로 알고 있어요.

OD 값이 0.4-0.6은 보통 competent cell을 만들 때 적당한 조건이었던 것으로 기억합니다.

대왕개구리SPEED  |  05.25 16:08  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 그렇다면 배지에 키운 균주 900 ul + 50% glycerol 500 ul 를 섞으면 얼추

농도가 15~20정도 되는데 이정도면 괜찮은 비율일까요?

: 17% 정도 나옵니다.

glycerol이 독성이 없기 때문에 사용 가능하지만 15~20% 정도 사용하는 것을

추천합니다.

균주는 항상 오래된것 보다  fresh한 균을 사용하여 stock하는 것이 좋습니다.

그렇다고 0.6OD를 사용해야 한다 라든지 O/N 균은 사용하지 못한다라는

것은 아닙니다.

사멸기에 들어간 균만 아니면 무방합니다. 

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