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질문 primary splenocyte, marcophage 분리
알날개달린코끼리(대학원생)  | 05.22 20:14

안녕하세요.

 

마우스에서 대식세포와 비장세포를 분리하려고 하는 대학원생입니다~~

 

저는 BALB/C 마우스에서 분리하려고 하는대요. 

CON 처리구와 면역억제제(CTX)를 유발한 처리구가 있습니다.

그런데 세포수가 너무 안나옵니다...ㅠ 

실험항목이 많은데 세포수가 너무 안나오는 것 같아서요..

혹시 세포 다루실때 팁같은 것이 있을까요..?

  CON CTX
대식세포 5*10^5/ml - 2ml 4*10^5/ml -2ml
비장세포 1*10^6/ml -10ml 5*10^5/ml - 5ml 

1. 그리고 대식세포, 비장세포 다룰 때 4도에서 진행하는 것이 좋나요?

2. 원심분리 조건은 1500rpm 4도 5분 하고 있는대 적당한가요?

3. 비장세포는 75T 플라스크에 세포 현탁액 5mL에 10ml 배지를 넣고 하루 인큐베이션 후 원심을 돌려서 석션 후 배지를 다시 넣어 카운팅 후 사용하고 있는대 방법이 맞나요? 혹시 부유세포는 석션하면 많이 빨려들어가나요?

4.  대식세포를 plate에 붙인 후에 24시간 뒤에 실험을 했더니 세포 상태가 많이 안좋은 느낌이었습니다..ㅠ 논문에는 2시간 인큐베이션 또는 24시간도 있던데 당일에 실험하는게 더 나을까요..?ㅠ

 

조언부탁드립니다 ㅠㅠ

#splenocyte
 
#marcophage
 
#세포수
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