실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
shRNA vector
레벨5 새슬 (과기인)
PLKO.1 vector로 shRNA cloning을 진행 중입니다.
AgeI과 EcoRI으로 2cut해서 gel elution 했는데, 농도가 3ng/ul로 total 90ul가 나왔습니다.
33ng vector에 inset oligo 6ul 써서 T4 ligation 진행했는데, colony가 하나도 뜨지를 않습니다.
vector가 있는지를 확인하려고 DNA 전기영동을 시행했는데, 15ng을 걸었는데, band가 보이질 않습니다.
Et-Br대신에 loading star 쓰고 있는데, 50ml 5ul넣어서 권장량을 사용했는데, 안보이는데, vector가 있는걸까요?
gel elution할때 band에 UV를 좀 많이쪼였는데, 그래서 DNA가 damage를 입은걸까요?
원인이 뭔지... 넘 궁금합니다.
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