실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
DNA 전기영동 밴드 분리가 안됩니다.
레벨1 아카시아꿀 (대학원생)
안녕하세요. Dna전기영동 때문에 한달째 고생하고있습니다. 그림에서 보시다시피 양끝쪽 레더를 보시면 사이즈가 큰 밴드들이 다 겹쳐서 나오거나 아예 밴드가 안뜨는 등 계속 반복되는 현상이 나와 샘플의 사이즈확인이 정확히 안됩니다. 0.5X TAE buffer로 0.8~1% agarose gel을 만들고 러닝버퍼도 당연히 같은 0.5X로 사용하였습니다. Low voltage, high voltage 둘다 러닝해봐도 그림같이 나옵니다.. 버퍼도 바꿔보고 아가로즈도 바꿔봣습니다. 레더가 이상한가해서 새로산 레더(오른쪽 끝) 도 걸어봐도 비슷한 현상이 나옵니다. 러닝타임은 30~1시간정도로 dye가 반이상, 약 삼분의 2정도 내려오면 스탑합니다. 아가로즈젤 두께도 5mm가 넘으면 잘안된다하여 4mm이하로 제작도 해봣습니다. 왼쪽 끝 레더는 takara사 1kb ladder이고 맨오른쪽 레더는 코스모진텍 1kb ladder입니다. 3kb이상부터 밴드가 다 겹쳐서 떠서 미치겠습니다.. 이정도면 기기문제인가요? 타카라사 mupid 투플러스 전기영동기기를 사용하고있습니다. 예상되는 샘플의 밴드는 원래 2kb와 5kb에 떠야되는데 2kb사이즈는 알겟으나 5kb가 맞는지 확인이 불가합니다. 그림은 Enzyme cut한 샘플인데 이전에 uncut(7kbp)한 걸 걸어봐도 5kb와 비슷한 위치에 떠서 확신을 못하겠습니다.. 무엇이 문제고 무엇을 더 시도해볼수있을까요? 조언 부탁드립니다..
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