실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Sequencing
RNA seq library 제작 과정에 대해 질문있습니다.
레벨2 무선충전기 (대학생)
안녕하세요 library 제작 원리에 대해 공부중인데, Second strand 합성중에 dTTP 대신에 dUTP를 사용하는 이유를 잘 모르겠습니다.
sequencing 진행시에 방향성을 위해서라고는 들었는데, 이후 step에서 3` adenylation 후 adapter ligation이 끝나면, 어차피 PCR로 enrichment를 진행하기 때문에 결국에는 forward와 reverse strand가 생기는 데 second strand에서 굳이 dUTP를 사용하는 이유를 모르겠습니다......
한가지 질문을 더 드리자면 firststrand 합성 후에 5`쪽에 phosphate가 붙게 되는데 이것은 cDNA가 합성된 뒤에 self ligation을 막기 위한 용도일까요??
고수님들 답변 기다리겠습니다.
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