실험 Q&A Cell Biology > Differentiation/Proliferation
3t3-L1 differentiation troubleshooting
레벨2 히어로홍시 (대학원생)
브릭 회원님들 안녕하세요.
저는 현재 지방세포를 이용한 실험중에 있습니다.
이렇게 브릭에 질문을 올리게된 이유는 제가 실험하고 있는 3T3 L1 세포의 DF 유도가 갑자기 잘 되지 않아 질문을 올리게 되었습니다.
과거에는 유도도 문제없이 잘 진행이 되었으며, Lipid droplet역시 아주 잘 관찰되었습니다.
그러다가 최근 언제부턴가 분화후 세포들이 첨부한 사진의 상태에서 크게 변하지 않는것을 확인하였는데 그 이유를 몰라 진행이 지연되고 있습니다.
세포 배양 및 분화는
1. subculture는 80% confluence에서 진행되었습니다.
2. 세포의 passage는 #5 입니다.
3. DF 조건은, seeding 5 x 10^4 cell이며,
seeding 후 2일차에 배지교체를 한뒤 2일 더 배양하였습니다(post-confluency).
이후 분화유도는 1uM Dex, 0.5 mM IBMX, 10ug/ml insulin + 10% FBS 배지로 처리를 하였으며 3일동안 분화를 유도하였습니다.
3일 후, 동인한 농도의 insulin 배지를 처리하여 2일 배양하였습니다.
마지막으로 FBS배지를 처리하여 3 - 4일 배양하였습니다.
4. 분화 유도에서 확인되는 부분은 배지가 끈적거리는 것을 확인할 수 있었으나, droplet 형성이 거의 되지 않네요..
혹시 어떤부분이 문제일까요..?
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