실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
WB sample만드는 방법
레벨5 실험어렵다 (대학원생)
안녕하세요
WB처음실험할예정이고 실험장비및 프로토컬을 처음 셋팅중인 학생입니다 ㅜ
저희가 프로토컬을 만들려고 하는대 한번 검토좀 부탁드립니다
① 6well이나 24well에 키운cell에 PBS로 2회 washing하고
② PBS1ml 넣고 scraper 긁어서 최대한 긁어 모은뒤 1.5ml tube로 옮긴다
③ mix by pipetting then transfer to an 1.5 ml e-tube
④ centrifuge at 11,000 g, 4℃ for 5 min and keep on ice
⑤ 상층액을 제거하고
⑥ RIPA buffer 40ul 첨가
⑦ 피펫팅해주면고 볼텍스 후 아이스1시간 incubate
⑧볼텍스 하고 다시 1시간 아이스에서 incubate
⑨ centrifuge at 11,000 g, 4℃ for 10min
⑩ 상층액을 새로운 tube로 옮겨주고
⑪ protein assay kit 인 BCA Protein assay kit 로 한다
이렇게 프로토콜을 만들었는대 부족한 부분이나 틀린 부분이 있을까요
주변에 아무도 없어서 물어볼곳도 볼곳도 없어서 남겨봐요
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