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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 SDS gel 전기영동 중 protein 마커 일부가 사라졌어요ㅠㅠ
알cold0(과기인)  |  05.18 14:47
첨부파일 파일첨부: 20200518_143809_209.jpg (109 KB)
이미지 첨부파일
전기영동 running 만 한 상태인데..
마커 윗부분 큰사이즈가 안나왔어요
이런 경우가 처음이라 뭐가 문제인지 짐작이 안가요

겔 만들때 6개 한번에 만들었는데
4개는 멀쩡한데 2개만 이상하게 나왔어요

겔도 버퍼도 전기영동 조건도 평소와 다 동일한데
대체 뭐가 문제일까요..?
#전기영동
 
#western blot
 
#page
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  05.18 15:55  

정상적으로 내려간 gel 사진의 모습은 어떤가요?

알cold0  |  05.19 10:00  
첨부파일 파일첨부: 20200519_095755_640(1).jpg (51 KB)
이미지 첨부파일
원래 이렇게 나왔어야 하는건데요..
이건 염색한거고
본문에 올린 실패작은 염색전.이긴 합니다
대왕개구리SPEED  |  05.19 10:19  

첫번째 gel은 염색을 안했나요?

sample band를 봐야지 gel문제인지 알수 있을 것 같습니다.

모두 직접 gel을 만들었고 continuous gel인가요?

 

알cold0  |  05.19 14:23  
첨부파일 파일첨부: 20200519_141853_999(1).jpg (70 KB)
이미지 첨부파일
본문에 있던 문제의 겔을 염색후 찍은 사진입니다.

겔은 모두 직접만든 12% SDS gel 이고
동일한 도구, 시약, 방법으로 만들었습니다.
대왕개구리SPEED  |  05.19 22:11  

두 장의 gel이 다르게 만들어 졌습니다.

marker 뿐마나 아니라 sample도 두 gel이 다릅니다.

알cold0  |  05.20 22:04  
겔 만든 시기가 다르긴 합니다.
잘 나온건 만들고 일주일쯤 후에 사용한거고.
이상하게 나온건 2주일쯤 지나 사용했어요.
그게 아무래도 영향이 있을까요..?

평소에 겔 만들면 유리플레이트를 핸드타올로 싸서 증류수로 적시고
비닐랩으로 딴딴하게 기포 쫙 빼서 여러번 싼 후에
다시 호일로 포장해서 냉장보관 합니다.
지나가다..  |  05.21 14:19   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

gel은 가능하면 그때그때 만들어서 쓰세요. 불편하더라도요..

실험실에서 만드는 gel은 아무래도 보관방법에 따라 품질 차이가 

많이 발생합니다. 제품화시킨 gel도 유통기한 짧은 경우가 허다하구요.. 

 

아무래도 seperate gel에 문제가 있는거같은데 마커가 날라간거에 대해서는

누구도 답변주기 힘들겁니다. 다시 해보는 방법외에는요. 

알cold0  |  05.21 14:59  
그렇군요ㅠㅠ
몇 일간에 걸친 답변에 정말 감사드립니다
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