total volume은 계산하지 않아도 됩니다.
0.21184/0.18016을 해주고 반응시간은 10으로 나눠주면 됩니다.
STD curve를 그릴 때 mg/ml로 하지 말고 umol로 그리면 계산하기 편합니다.
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(대학생)
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20.05.15 22:41
답변 감사합니다. 죄송하지만 추가 질문해도 될까요
알려주신 대로 계산했을 때, 1.17U이 나오게 됩니다.
이걸 unit/mL로 할 경우, 반응했던 total volume 값이 필요한 건가요?
효소액 100uL를 volume으로 보고 10을 곱해 1mL로 봐야하나요
아니면 total 300uL에서 1mL로 단위가 되도록 곱해줘야 할까요
STD curve를 구할 때 반응 용액의 구성을 알아야합니다.
어떤 성분을 각각 얼마나 혼합해서 반응했나요?
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(대학생)
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20.05.15 22:50
Standard curve의 경우, glucose 1mg/mL를 원액으로 하여, 0.1배, 0.2배, 0.4배
0.6배, 0.8배로 희석하여 각각 300uL를 DNS 900uL 주입시켜 boiling 했습니다.
그리고 저 위의 실험에서는 효소액 100uL와 기질인 CMC 1% 100uL, 100mM citric acid(pH6) 100uL, 총 total volume 300uL으로 반응 후 이 역시도 DNS 900uL 넣어 boiling 진행했습니다.
STD curve 측정 시 glucose 농도 별 100ul + DW 200를 사용해야 하는데
glucose 300ul를 사용했네요.
이 경우 효소액 100ul를 반응 했으면 3X를 한 후 ml당 glucose양을 구하면 됩니다.
왜냐하면 STD가 300ul를 사용해서 ml당 glucose 농도로 값을 구했기 때문입니다.
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(대학생)
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20.05.15 23:09
매번 친절한 답변 감사합니다. 부족한 저에게 정말 큰 도움이 되었습니다. ㅠ
송구하지만 끝으로 마지막 질문 답변 부탁드리겠습니다. ㅠ STD 작성 시에 glucose 300uL를 썼으므로, 반응 시 100uL의 효소액에 대해 3X를 해주는 것은 단지 graph에서의 목적 시료의 volume을 맞추기 위함인가요?
unit 계산시 1.17U가 나왔으니, 효소액 100uL에서 3X를 하면 300uL이고, mL로 단위를 바꿔야 하니 Unit과 분모에 3.333...를 곱하므로써, 3.89999...U/mL가 정답이..죠?
SDT 단위는 측정에 사용 300ul가 아니라 ml로 계산되어 있을 겁니다.
따라서 sample과 STD가 같은 볼륨을 사용하면 바로 sample 단위에 ml를 붙이면
되는데 이 실험은 STD 대비 1/3 부피의 시료를 사용했기 때문에 3배만 곱하면
ml로 바로 환산됩니다.
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(대학생)
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20.05.15 23:35
STD에서의 glucose 반응량은 300uL (mg/ml)
실험에서의 효소액 반응량은 100uL으로, /mL 단위를 쓰기 위해
(volume이 3배이므로) 3X를 하여 1.17U이 3.51U가 되고, /mL를 붙혀
최종 3.51U/mL이 된다는 거군요.
정말 감사합니다!