실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
CO-IP과정중에
레벨1 bbbb (일반인)
실험순서가 다음의 순서인데요..
1.원하는 단백질이 들어있는 sample에 그 단백질을 항원으로 인식할 수 있는 항체를 섞어준 후 1시간에서 여러시간 동안 incubation을 하여 항원-항체 복합체를 형성한다.
2.그 복합체를 고정화된 proteinA/G agarose gel support에 30분~2시간 동안 incubation시켜 붙잡게 한다.
3. 원심분리를 통해 침전된 복함체로 부터 결합하지 않은 단백질들을 씻어 제거한다.
4.침전 복합체에 SDS-PAGE sample buffer을 첨가하여 끓여준다.
5.gel support로부터 SDS-PAGE sample buffer로 녹아든 sample을 체취하고 SDS-PAGE를 수행한다.
6. 항원-특이적 항체를 이용하여 immunoblot을 수행한다.
6번 immunoblot이 sds-page로 겔전기영동을 수행하는건데 그전에 5번에서도 sds-page를 수행한다고 하는데 총 sds-page과정이 2번 반복되는게 맞나요??? 왜 이렇게 진행하는지 이유가 궁금하네요,,
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