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RNA electroporation
레벨1 늙은호박 (대학생)
안녕하세요~! 대장균 가지고 CRISPR 실험을 하고 있는 학생입니다.
제가 DH5a와 HB101에 cas9 plasmid를 형질전환을 시키고 competent cell을 만들었습니다. 여기에 gRNA를 plasmid 형태가 아니고 trRNA와 crRNA를 합쳐서 대장균 세포 안에 넣을려고 시도하는 데 잘 안되는 거 같아서 질문드립니다.
1.RNA를 electroporation으로 넣고 싶은 데 전압을 어느 정도로 맞추면 좋을까요?
지금까지 630V, 620V, 1300V, 1800V, 2000V 해봤고 다 5ms로 나왔습니다. 저희 기기가 pulse length는 조절하지 못해서 기기는 ECM399 쓰고있습니다. 큐벳은 0.1cm쓰고 있습니다.
2.아니면 RNP 형태로 대장균 competent cell에 집어넣기 위해서는 voltage 하고 pulse length가 어느 정도가 적당할까요?
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