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 전체 > Molecular Biology-Protein > Pull-down Assays
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질문 이종 간의 단백질 interaction이 가능한가요?
 | 2008.11.22 13:10
답변있는 질문은 수정/삭제 불가(☞문의)
mouse의 A와 mouse의 B단백질의 interaction을 보고 있습니다.

flag-A를 293T에서 과발현 시키고 lysate를 얻어 GST-B fusion 단백질을 이용해서

pull down assay를 합니다.

그런데 생각보다 interaction이 매우 적게 나옵니다.

antibody도 매우 좋은데 말이죠.

그래서 생각해본게..

혹시 human의 A 단백질이 mouse의 A단백질과 competitor처럼 B와 binding하기

때문이 아닐까 라는 것입니다.

이종간의 단백질의 interaction이 가능한지, 그리고 그게 competitor가 될수 있을까요?
#단백질 interaction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이ㅎㅎㅎ  |  2008.11.22   
원래 A와 B에 대한 결합관계를 미리 아시고 실험을 하는것인지 묻고 싶습니다. 단백질의 결합관계를 예상할때 강하게 결합을 할수도 있지만.. 여러가지 버퍼의 조성이나.. 염농도에 의해서 떨어지는 경우도 많이 있습니다. 이종간의 단백질이 결함이 가능할수 있겠지만.. 그건 안해보곤 모를것 같습니다. 그렇지만. 님께서 현재 과발현 상태이기 때문에 엔도에서 발현되는 단백질은 무시하셔도 될듯 합니다. 그리고 어차피 컨트롤과의 차의가 중요하기 때문에 그것에 촛점을 ... 두시는것이 좋을듯 합니다. 293에 의한 차의라고 생각이 드시면.. 다른 셀라인으로 바꾸어 비교해 보시는것은.. 어떠신지요..^^ 좋은 결과 얻으시길 바라겠습니다.
 |  2008.11.22    
넵 B 도메인으로 스크리닝해서 나타난 band를 mass를 찍어 알아낸 A 단백질이기 때문에 결합한다는 것은 확실합니다. coomassie로 band를 확인한것이니 무지 많겠죠.

근데 양적인 문제가 있습니다....과발현한 A와 B가 10이 있을때 WB band가 10이 뜬다면
B를 2로 줄였을때 band가 0.1정도로 확~ 줄어버려서요.
Endogeneous human A가 competitor로 작용해서 mouse의 B가 많아야만 붙지 않을까 싶어서 이런 생각을 하게 된 것입니다.
아 그리고 buffer 조성은 interaction test와 screening 과 동일합니다
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