1. 사용한 Raw cell의 passage No.가 어떻게 되나요?
2. LPS 처리 농도가 어떻게 되나요?
3. 무처리군, 처리군은 몇개 well로 실험했나요?
4. 무처리군, 처리군의 실제 viability data가 어떻게 되나요?
5. 무처리군, 처리군에서 NO를 측정해 보세요.
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레벨2
carpediem1
(대학원생)
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20.05.07 15:01
1. 사용한 Raw cell의 passage No.가 어떻게 되나요?
--> p4에서 진행했습니다.
2. LPS 처리 농도가 어떻게 되나요?
--> 100ng/mL
3. 무처리군, 처리군은 몇개 well로 실험했나요?
--> 각 3개씩 진행했습니다 (96 well 기준).
4. 무처리군, 처리군의 실제 viability data가 어떻게 되나요?
--> 무처리군 약 100% (오차 1~2%), 처리군 약 150% 정도 입니다.
5. 무처리군, 처리군에서 NO를 측정해 보세요.
--> 무처리군 5uM 이하 처리군 35uM 정도 입니다.
---- SPEED님 NO는 저때의 viability 환경과 다른 환경이긴 한데.. (처리한 일자가 다름) 일단 다시 진행해보려고 실험 준비중입니다. 일단 저도 다시 진행해보고 나서 viability를 확인해보겠습니다^^
NO 값은 이번 결과와 다른 시점의 결과서 의미가 없습니다.
viability와 NO를 동시에 측정해 보세요.
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레벨5
Crystallographer
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20.05.08 20:32
LPS 가 endotoxin이라서 죽을거라고 생각하는 사람이 많지만..
오히려 innate cell에서는 activate함으로써 세포가 더 활발하게 유지 되거든요
RPMI/DMEM media가 LPS 했을때 오래지나면 노랗게 변하는것도 활발하게 증가한다는거죠.
하지만 LPS 처리후 아주 오랜시간 >24 시간이 지나면 nutrient도 부족해지면서.. 그때부터 viability가 떨어질 수 있죠.
LPS처리전에는 quiescent state 즉 inactivate 한 status이기 떄문에 ATP를 많이 만들지도 않고.. viability에도 차이가 별로 없는걸거에요.
가장 좋은 방법은 annexin V로 viability 체크하는게 더 좋을겁니다 !
모든 세포에서 LPS 처리 후 동일한 viability가 나오는 것은 아니고 Raw cell은
내려 가는게 정상입니다.
이건 기초적인적인건데 이정도 질문을 하신다면 실험 배우기 시작하는 분이라 가정하고 말씀드려도 될런지요...보통 well에 세포 seeding하는 데 인큐베이터의 상태에 따라 가장 바깥쪽 well은 미디어가 잘 증발 하기도 합니다. 그래서 세포 생존률에 영향을 줍니다. control군이 lps군보다 plate의 외부와 가깝다면 메디어가 더많이 증발하여 영햐을끼칩니다. 세포를 seeding한 well을 한바퀴 빙~둘러서 pbs등을 체워서 증발을 방지해주세요~ 원래 결과 잘 안나오면 이것저것 고쳐보아야합니다.
혹은 세포 seeding시에 잘 흔들면서 seeding하지 않으면 세포가 가라앉기 때문에 나중에 seeding한 그룹에 세포가 많이 깔리는 경향도 있습니다~
이것저것 고려해보세요~ 그리고 항상 기록을 남겨 같은 원인을 찾고 같은실수 반복 안하는게 중요합니다.