실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
단백질 정량 protocol 질문입니다.
레벨5 202020 (대학생)
His 단백질 정량을 하고 있습니다. Protocol에서
1.Add two resin-bed volumes of Equilibration Buffer and mix until the resin is fully suspended.
2.Prepare sample by mixing the protein extract with an equal volume of Equilibration Buffer. The total volume should equal at least two volumes of the resin bed.
위에 2 과정이 있는데 resin은 Equilibration buffer을 써서 평형상태를 만들어 준다는 건 이해가되는데 2번째 프로토콜에서 단백질도 평형상태로 만드는데 단백질도 평형상태로 왜 만들어야하는지 이해가 안됩니다. 또, 만약 10ml의 단백질 추출물이 있다면, 2번째 프로토콜대로 하면 10ml의 Equilibration buffer을 넣어 총 20ml이 되는데 그럼 이때는 resin을 최소 10ml써야하는 건가요?? resin의 양이 너무 많다고 느껴지는데.. 조언부탁드립니다.
마지막으로, Samples containing 6M guanidine•HCl must be dialyzed against a buffer containing 8M urea before SDS-PAGE analysis.라는 부분이 있는데 guandine을 없애기 위해서 8M의 Urea가 포함된 1xPBS에서 dialysis을 시키라고 되어있는데 1L의 PBS당 얼마정도의 8M의 urea를 넣어서 dialysis시켜야하나요??
조언의 답변 부탁드리겠습니다.
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