실험 Q&A Immunology > Antibody
western blot detection이 계속 band가 나오질 않습니다..도와주세요..
레벨1 생밀레 (대학원생)
안녕하세요 지금 석사 1학기 재학중인 대학원생입니다
다름이 아니고 제가 western blot하면서 계속 detection했을 때의 결과가 일부만 항체가 붙은 것 처럼 모든 well에서 band가 안 나오고 일부만 나오고 다른 부분은 깨끗하게 아무것도 나오지가 않습니다. 그런데 이게 언제는 안 그러다가 언제는 일부만 band가 나오다가 해서 문제입니다. (혹시 몰라 사진을 첨부합니다). 또 어떤 날은 아무런 band도 나오지 않고 깨끗합니다. developer나 ECL solution의 문제는 아니에요...
COX-2 detection 결과인데, beta actin의 경우에도 이런 적이 있습니다. 그런데 뭐가 문제인지 도저히 감을 못잡겠습니다. 1차 항체의 희석이나 solution, protocol상의 문제도 없습니다. 왜 이런 일이 일어나는지 거의 몇달 째 이런일이 일어나서.. 2차항체의 희석이 너무 높은 건가 싶은 생각도 드는데 혹시 같은 일을 겪어보신 선배님들은 없을까요..?
참고로 1차항체는 1:4,000 2차항체는 1:5,000의 비율로 사용했습니다.
다른 회사의 항체를 사용했을 때는 1차 1:1,250 2차 1:5,000으로 사용했었는데 그 때도 이런 상황이 있었구요..이게 왜 이런일이 일어나는 걸까요..?
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