실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
qPCR Ct값 N/A
레벨2 ddw604 (대학원생)
안녕하세요.
real time PCR 실험을 하다가 몇 가지 질문드립니다.
GAPDH primer의 Ct값은 NTC에서는 N/A가 나오고
CTR에서는 27~28, sample 처리한 부분에서는 22~25사이 값이 나옵니다.
그리고 gene expression을 보고자 하는 gene의 primer에서는 Ct값이 38~정도가 나오고 대부분 N/A라고 뜹니다..
세포에서 RNA를 분리하였고, 순도가 2.1 정도였고 그 RNA 1ug으로 cDNA합성 키트를 사용하여 cDNA를 합성하였고, syber green mix+cDNA(10배희석)+reaction mix + transcriptase+primer 를 넣어 RT-PCR을 진행하였습니다.
1. melt peak이 지저분하게 나오는데 이유가 있을까요? (사진 본문첨부)
RNA도 꽤 깨끗하게 얻어졌다고 생각했는데 어디가 문제인지 모르겠습니다.
.
2. Ct값이 N/A가 나왔다는것은 Ct값이 너무 커서
즉, 유전자가 너무 적어서그런 것인가요?
혹시 제가 cell에 보고자 하는 gene이 없어서 이런 현상이 나오기도 하나요?
답변 부탁드립니다.
감사합니다..
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