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질문 약물처리 타임별로 할 때 cell density
뒷다리s_s(일반인)  | 04.22 15:34

안녕하세요!

아무리 생각해도 답이 나오지 않아 이렇게 질문하게 되었습니다!

 

Western blot에 사용할 샘플이나 그외에 물질의 효과를 타임별로 보고자 할 때 보통 세포양은 어떻게 조절하시나요?

세포 density가 약물의 효과에도 영향을 미칠 것 같은데..

overgrowth가 되도 안될 것 같고..

세포가 많이 없으면 단백질 정량에도 무리가 있고..

이건 늘 고민되네요..

아래와 같은 두가지 방법을 생각하고 있는데요!!!

 

1. 초기부터 세포수를 조절하여 각 약물처리 시간에 맞게 seeding 한 후 약물처리해서 배양한 후  각 타임별로 샘플 prep할때 cell density가 100%정도 되게함

2. 초기부터 세포수는 동일하게  seeding 하고 약물처리시 serum을 0.5% 정도로 낮춘 media를 사용하여 약물처리하여 배양한 후 타임별로 샘플을 prep

 

보통 어떤 방법을 사용하시나요?

저희는 1번 방법을 사용하고 있는데요..

배양시간이 길어지면 세포수가 좀 적다고 느껴져서요..

72시간 정도 배양하는 샘플의 경우에는 약물처리할때 보면 cell density가 50%정도 밖에 안나올 것 같은데..

 

이렇게 cell density가 다른 상태에서 약물을 타임별로 처리한다는게 과연 약물의 정확한 효과를 볼 수 있는 것인가 하는 의문점이 드네요..

 

#cell density
 
#약물처리 시간
 
#time
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  04.22 16:10  

어떤 compound의 세포효능을 확인하는 실험 design은 셀수 없이 많습니다.

질문에는 2가지만 있지만 수많은 방법 중에 속한 방법입니다.

무엇을 어떤 형태로 결과를 획득 할 것인지에 따라 실험 디자인을 하면

됩니다.

질문에서 걱정하는 cell number와 compound의 농도의 관계는 반드시

상관 관계가 있습니다.

이것 또한 예비 실험을 통해 초기 cell number, compound 처리 시 cell number,

그리고 처리 시간, target 단백질을 볼것인지 아니면 mRNA를 볼것인지에

따라 실험 디자인이 모두 달라집니다.

실험자가 합리적으로 정한 실험 디자인으로 실험하면 되며 실제 약으로

개발 하기전 또는 paper 수준에서는 별로 문제가 되지 않습니다.

실제 약으로 개발하려면 세포 보다는 동물 실험, 동물실험에서는 소동물

보다는 중, 대 동물, 동물 보다는 임상실험이 중요하며 다음 단계로 전진하기

위한 합리적인 근거를 제공하면 됩니다.

뒷다리s_s  |  04.23 10:34  

답변 감사합니다.

 

그럼 혹시..세포가 이제 막 붙기 시작한 상태에서 약물처리는 괜찮은건지 의문이 들어서요..

 

 

대왕개구리SPEED  |  04.23 10:40  

compound가 효능이 있든 없든 관계 없이 seed culture를 하고 cell이 안정되는

시간이 지난 후 처리하는 것이 좋습니다.

18시간 ~ 24시간 정도는 지나는 것이 좋을 것 같도 따라서 sedding하고 다음날

처리하면 됩니다.

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